[发明专利]一种超低游离硫酸基的低分子量肝素钠的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及制药技术领域，特别是涉及一种超低游离硫酸基的低分子量肝素钠的制备方法。

背景技术

依诺肝素钠是一种低分子肝素钠盐，主要用于预防静脉血栓栓塞性疾病(预防静脉内血栓形成)，特别是预防与骨科或普外手术有关的血栓形成；《中华人民共和国药典2010》中规定，肝素钠(Heparin Sodium)是自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，具有延长血凝时间的作用。肝素钠按干燥品计算，每lmg的效价不得少于170单位。

低分子量肝素是一种低分子肝素钠盐或者钙盐，是一种新型的抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)依赖性抗血栓形成药，其药理作用与普通肝素钠基本相似。

普通肝素可分离抗血栓活性和抗血凝活性，血浆中凝血酶(即因子Ⅱa)活性与血凝关系密切，因子Xa活性与血栓形成关系较密切。

由于低分子量肝素抗因子Xa活性与抗因子Ⅱa活性之比值为2.5～5.0，而普通肝素为1.0左右。因此，低分子量肝素对体内、外血栓，动、静脉血栓的形成有抑制作用，它能刺激内皮细胞释放组织因子凝血途径抑制物和纤溶酶原活化物，而不被血小板第4因子中和，同时对血小板功能亦无明显影响。

低分子量肝素对血栓溶解有间接协同作用，可用于治疗已形成的深部静脉血栓。预防性抗血栓治疗只需每天皮下注射一次，一般不需实验室监测。由于低分子量肝素比普通肝素性能优越，所以目前低分子量肝素的科学研究发展较快。

本发明的申请人枣庄赛诺康生化股份有限公司于2013年05月14日申请了申请号为201310175175.1的发明专利，公开了一种由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法；苏州法思特生物制药科技有限公司在2008年02月26日提交了申请号为200810020765.6的发明专利，其公开了一种超低分子肝素钠(钙)的生产工艺。这两件发明专利的原理均是用利用阴离子树脂吸附肝素钠或者低分子量肝素和溶液中的杂质，然后用低浓度的氯化钠溶液洗涤离子交换柱，用以洗涤掉小分子的极性不太强的杂质，而把肝素或者低分子量肝素留在交换柱内；然后再用高浓度的氯化钠(或钙)溶液洗脱肝素或者低分子量肝素。

上述一种超低分子肝素钠(钙)的生产工艺在高浓度氯化钠(钙)洗脱离子交换树脂时，低分子量肝素(钠)钙被洗脱下来的同时，硫酸根等极性较强的物质也可能一同被洗脱下来，不能够实现低分子量肝素(钠)钙与游离硫酸根的分离。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，而提供一种仅吸附去除游离硫酸根，保留低分子量肝素的超低游离硫酸基的低分子量肝素钠的制备方法。

为实现本发明的目的所采用的技术方案是：一种超低游离硫酸基的低分子量肝素钠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)称取100g的肝素钠，用纯化水溶解，制备成5％～15％(w/v)的肝素钠溶液，并控制溶液温度为30℃以下,搅拌；

(2)用6mol/L的盐酸调节步骤(1)制备溶液的pH值为2.3～3.0，搅拌；

(3)将2.3～3.5g的亚硝酸钠加入到步骤(2)的溶液中，搅拌并保持pH值稳定，反应时间为1.5小时；

(4)反应完成后迅速用1mol/L的氢氧化钠调节溶液pH值为8.0～10.0；将事先称量的肝素钠重量1～3％(w/w)的硼氢化钠加入，保持12小时，用6mol/L的盐酸调节pH值为3.5～4.0，保持30分钟后再用1mol/L的氢氧化钠调节pH值为6.5；

(5)在步骤(4)得到的溶液中加入2倍体积量的乙醇，静置12小时，去除上清液得到沉淀A；

(6)用1000ml纯化水溶解步骤(5)得到的沉淀A制成溶液，然后将此溶液流过离子交换树脂，得到流出液；

(7)将步骤(6)得到的流出液中加入其体积1.5％(w/v)的氯化钠，然后再加入乙醇，得到上清液和沉淀B，所述沉淀B经过洗涤、脱水、干燥即得超低游离硫酸基的低分子量肝素钠。

所述步骤(6)中使用的离子交换树脂采购自南开大学201×7阴离子交换树脂、Amberlite IRA-400或Diaion SA-10A。