[发明专利]一种快速定量蜂蜜品质的高效液相色谱方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种定量蜂蜜品质的色谱方法，尤其涉及一种快速定量蜂蜜品质 的高效液相色谱方法。

背景技术

蜂蜜中含有超过180种活性物质，其主要成分为果糖和葡萄糖及4％～5％ 的低聚果糖，另外蜂蜜中还含有丰富的氨基酸、维生素、活性酶、类黄酮、多酚 类、类胡萝卜素等活性物质及多种矿物质。蜂蜜具有抗氧化、抗菌、加速创伤修 复、增强免疫力等多种生理活性，因而蜂蜜不但被作为一种直接有效的营养补充 来源，而且被应用于治疗肝炎、癌症、伤口感染、便秘以及改善胃肠功能、提高 机体免疫力等。

近年来，蜂蜜作为一种药食两用的天然保健品，受到越来越多的青睐。我国 是养蜂及蜂蜜出口大国，20世纪90年代我国蜂蜜出口量占世界年贸易量的4 0％。然而，蜂蜜是一种极易掺假的食品，近年来由于掺假等质量问题，使我国 蜂蜜产品的信誉越来越低，出口量逐年下降。为了规范蜂蜜市场，国家标准化委 员会于2005年10月26日发布了GB18796—2005《蜂蜜》国家强制性标准， 并规定自2006年3月1日起实施。GB18796—2005规定蜂蜜中果糖和葡萄 糖含量应大于等于60％，而欧盟、日本等蜂蜜进口国还规定了蜂蜜中还原糖含量 及果葡比等参数。因此，必须建立一系列蜂蜜中还原糖的测定方法，既可以保护 消费者利益，又对蜂蜜生产企业的生产具有指导意义。

目前，关于蜂蜜中还原糖测定的方法主要有滴定法、旋光法、薄层色谱、高 效液相色谱法、离子色谱脉冲安培法、气质联用法、高效毛细管电泳法、核磁共 振法等。但是传统的滴定法、薄层色谱法、旋光度法操作繁琐而且准确度不高。 高效液相色谱法采用示差折光检测器或蒸发光散射检测器，灵敏度较低，且受温 度、流动相影响大。离子色谱脉冲安培法用于单糖、二糖、小分子寡糖的测定， 具有灵敏度高、选择性好、不用衍生、操作简便等有点。但是，离子色谱对试剂、 进样样品要求较高，样品前处理步骤要求严格，而且需要专门的离子色谱和脉冲 安培检测器。毛细管电泳、气质联用、核磁共振等方法设备昂贵，不易在国内中 小型蜂蜜生产企业内普及。

发明内容

本发明采用高效液相色谱法，旨在建立一种同时测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、 蔗糖的方法。

为实现上述目的，一种快速定量蜂蜜品质的高效液相色谱方法，本发明采用 了以下技术方案：收集具有代表性的蜂蜜样品10～20份，称取适量样品，用纯乙 腈前处理，供高效液相色谱检测用。以糖专用分析柱为色谱柱，乙腈-水(75∶25) 为流动相。用示差折光检测器检测，外标法定量，计算葡萄糖、果糖和蔗糖的含 量。

所述色谱柱为糖专用分析柱(4mm×250mm)。

所述色谱柱柱温为35℃。

所述流动相流量为1ml/min。

所述流动相进样量为10μL。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：

用高效液相色谱分离、测定蜂蜜中的可溶性糖的研究报道很少，本发明利用 高效液相色谱和糖专用分析柱成功地分离了蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖，以乙 腈:水＝75:25为流动相，15min左右即完成色谱分离过程，分离效果良好，测定 的重复性高，检测灵敏，回收率在97.0％～98.9％之间，前处理和操作简单。本发 明溶剂采用乙腈和水，可回收利用，无污染，实现清洁生产。既保护消费者利益， 又对蜂蜜生产企业的生产具有指导意义。

具体实施方式

实施例1一种快速定量蜂蜜品质的高效液相色谱方法

1、样品处理

称取果糖、葡萄糖分别约100mg、蔗糖约20mg，精密称定，置50ml量瓶 中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

称取0.5g蜂蜜样品，加入2mL纯乙腈，65℃水浴10min，10000r/min离 心20min，吸取上清液于25mL的容量瓶，残渣加入3mL蒸馏水，65℃水浴10 min，10000r/min离心，合并上清液，按此方法再提取一次，合并上清液，并用 蒸馏水定容至25mL，抽取5mL用有机系(0.45μm滤膜)过滤，供高效液相色谱 检测用。

2、色谱分析条件

岛津LC-20A液相色谱仪，色谱柱为糖专用分析柱(4mm×250mm)。示差 折光检测器。流动相：乙腈-水(75∶25)，柱温35℃，流量1ml/min，进样 量10μL。