[发明专利]重组蛹虫草超氧化物歧化酶的制备方法

权利要求书

1.一种重组蛹虫草超氧化物歧化酶,其特征在于，所述蛹虫草超氧化物歧化酶氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.分离的核酸分子，其特征在于，所述分离的核酸分子的核苷酸序列如

编码SEQ ID NO:6的氨基酸序列的SEQ ID NO.5所示。

3.一种重组蛹虫草超氧化物歧化酶，其特征在于，所述蛹虫草超氧化物歧化酶通过表达编码SEQ ID NO:6的氨基酸序列的SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列获得。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。

5.如权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为pET22b。

6.一种工程细胞，其特征在于，所述工程细胞是通过转化权利要求4所述的表达载体进入宿主细胞后获得的细菌细胞。

7.如权利要求6所述的工程细胞，其特征在于，所述工程细胞为大肠杆菌BL21(ED3)细胞。

8.一种制备重组蛹虫草超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括:

a)将SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列克隆入表达载体pET22b的步骤；

b)将所述表达载体pET22b转入到宿主细胞大肠杆菌BL21(ED3)细胞的步骤；

c)将宿主细胞大肠杆菌BL21(ED3)细胞进行培养步骤，培养条件包括：培养分为培养阶段和诱导阶段，培养阶段培养菌液浓度达到OD600，诱导时间为18-21hr，发酵及诱导温度保持在16-25℃，诱导期IPTG浓度在0.1-0.2mM/L；

d)分离纯化出融合表达的重组蛹虫草超氧化物歧化酶的步骤，对发酵样品通过离心和/或过滤方式收集菌体，用溶菌酶1mg/g菌体，在37℃条件下，处理2小时，再通过离心获得清液；

e)通过盐析和/或超滤进行初步纯化步骤，所述盐析为用0-60％中性硫酸铵分级粗提蛋白，超滤用超滤膜进行过滤，所述超滤膜为截留分子量为10KD的超滤膜；

f)通过阴离子交换、疏水层析方法，从而获得纯度达到95-99.9％的重组蛹虫草超氧化物歧化酶的步骤。

9.如权利要求8所述的方法制备的重组蛹虫草超氧化物歧化酶在制备治疗与人超氧化物歧化酶相关疾病的药物、食品、保健品及其化妆品中的用途。