[发明专利]一种针对人膜联蛋白A2受体基因的siRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及特异性抑制膜联蛋白A2受体的小核酸干扰分子，以及在制备治疗新生血管性疾病药物中的应用。

背景技术

新生血管性疾病是一种在原有血管基础上生长出新血管的过程，具有重要的生理及病理意义。在出生后新生血管生成利于组织器官的生长，但在成年时期，大部分血管维持在静止状态，在病理性刺激下，血管内皮内皮细胞可以恢复增殖能力，以进一步促进新生血管形成。病理性新生血管的生成涉及到多种细胞因子的分泌及调节失控，其参与了多种疾病的发生发展，如肿瘤、糖尿病视网膜病变、类风湿性关节炎及肺动脉高压等等。在过去的十年间，研究人员进行了大量研究寻求抑制新生血管的治疗策略，以预防及治疗肿瘤、关节、眼底和皮肤病变等。目前抗新生血管药物，血管内皮生长因子单抗，已经应用于临床治疗新生血管性疾病。然而，由于血管内皮生长因子单抗发挥作用时效较短，需要多次治疗，并且存在一定的全身性副作用。因此，寻求其它安全有效的治疗手段，对治疗新生血管性疾病具有重要的意义。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术是近来发展日趋成熟的一门基因沉默技术，是内源性或外源性的双链RNA在基因转录后水平上，介导细胞内信使RNA(mRNA)发生特异性降解，导致靶基因表达沉默，从而产生相应功能表型的缺失，是特异性抑制靶基因表达的过程，具有高效性、特异性的特点。在不影响正常基因功能的前提下，RNA干扰可以抑制重要基因的表达，从而达到基因治疗的目的，其对靶基因具有很好特异性及对目的基因抑制作用是其它药物难以匹敌的。随着RNA干扰技术的不断完善，针对病理性新生血管的RNAi具有广阔的应用前景。

膜联蛋白A2受体(Annexin Ⅱ receptor,AXIIR)，又称5号染色体开放阅读框39(Chromosome5open reading frame39,C5orf39)，最早是在人骨髓cDNA中被克隆出来，并发现其可以与膜联蛋白A2相互作用，后鉴定为膜联蛋白A2的受体(Lu G,Maeda H,Reddy SV,Kurihara N,Leach R,Anderson JL,et al.Cloning and characterization of the annexin II receptor on human marrow stromal cells.The Journal of biological chemistry2006；281:30542-50)。AXIIR的基因编码蛋白为193个氨基酸，并且其表达具有种属差异性，在人、猿、猴等中表达，而在鼠、兔等中不表达。研究人员发现AXIIR可以与膜联蛋白A2相互作用，介导膜联蛋白A2促进细胞增殖，迁移和黏附(Annexin II interactions with the annexin II receptor enhance multiple myeloma cell adhesion and growth in the bone marrow microenvironment.Blood2012；119:1888-96)。然而，有研究发现，AXIIR不是膜联蛋白A2的特异性受体，可以诱导多种细胞的凋亡(Xiong Y,Fan C,Kong L,Dong L,Zhu N,Zhang J,et al.Annexin II receptor induces apoptosis independent of Annexin II.Apoptosis:an international journal on programmed cell death2013；18:925-39.)。这些研究表明，AXIIR除介导膜联蛋白A2功能外，还发挥着广泛的功能。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性抑制膜联蛋白A2受体的siRNA，本发明另一目的在于提供该siRNA在制备治疗新生血管性疾病药物中的应用。

本发明以RNA干扰技术为基础，从GenBank获得人膜联蛋白A2受体(AnnexinⅡreceptor,AXIIR)的cDNA序列(GenBank:AY032883.1)，根据siRNA靶序列的基本原则，针对AXIIR设计了三条21个核苷酸的siRNA，其序列如下：

将上述干扰RNA转染进脐静脉血管内皮细胞后发现，siRNA2抑制AXIIR基因表达的干扰效果最明显。

本发明的第一方面，是提供了一种抑制人膜联蛋白A2受体的干扰序列(siRNA2)，其序列如下：