[发明专利]草甘膦胶体金检测卡

说明书

技术领域

属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是草甘膦试纸检测方法。

背景技术

草甘膦是一种非选择性、无残留灭生性除草剂，对多年生根杂草非常有效，广泛用于橡胶、桑、茶、果园及甘蔗地。

草甘膦属低毒除草剂。主要抑制植物体内的烯醇丙酮基莽草素磷酸合成酶，从而抑制莽草素向苯丙氨酸、酷氨酸及色氨酸的转化，使蛋白质合成受到干扰，导致植物死亡。

我国已制定的一些农副产品中的农药最高残留限量表中草甘膦在水果中的限量为0.1mg/kg。

发明内容

本发明目的在于提供快速检测出食品中草甘膦的残留。

本发明的技术方案是草甘膦的检测卡及其检测样品的处理方法。草甘膦的检测卡是在长条扁平薄壳状的检测卡外壳内设置检测条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔，其特征在于测试条是由支承背板上粘贴四种原件组成：支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端上粘贴吸水纸，另一端粘贴样品垫，吸水纸内端与硝酸纤维素膜搭接，样品垫与硝酸纤维素膜之间则有一段金标垫，由金标垫将样品垫与硝酸纤维素膜连接在一起。金标垫中是含有第二种属蛋白和草甘膦抗体的混合物，硝酸纤维素膜上横向有2条间隔开的显色印记带，一条是含草甘膦蛋白质偶联物的检测带，另一条是第二种属动物蛋白的IgG（常用的为抗兔抗体或抗鼠抗体）；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

样品处理方法是：称取试样2±0.05g于50mL的离心管中，加入10mL超纯水，在1800r/min条件下用高速组织粉碎机打碎（约1min），取粘稠液加50%三氯乙酸2mL和二氯甲烷10mL，在回旋式振荡器上高速振摇30min。然后在4℃5000rpm条件下离心30min，取上清10mL，加二氯甲烷2mL，在回旋加速器上振荡混合20min，再在4℃12000rpm条件下离心30min，上清液即为药物的抽提液。

本发明的优点是能快速检测出样品中含有的草甘膦，且节省检测成本，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。

附图说明

图1是草甘膦检测卡外壳及检测试纸条在外壳内的安置图。

图2是草甘膦检测卡检测试纸条结构示意图。

图3是检测试纸条硝酸纤维素膜上显示印迹带示意图。

具体实施方式

1.标记胶体金的制备

胶体金溶液的制备：先将1g氯金酸（HAuCl₄）粉末溶于100mL超纯水配置成1%的氯金酸溶液；再取1L超纯水于特质电炉上加热，至沸腾后加入10mL1%的柠檬酸三钠水溶液，沸腾后继续加热，5分钟后加10mL1%的氯金酸溶液，再次加热至沸腾，等待颜色变为酒红色后开始计时，10分钟后停止加热，取下后自然冷却、定容至1L，即为胶体金溶液。

抗体标记：确定抗体所需的0.1mol/lK₂CO₃的比例，取100mL胶体金溶液，加入此比例0.1mol/L的K₂CO₃，混匀（约5min），再将草甘膦和第二种属动物蛋白分别用PBS（0.01mo1/L，pH7.4）溶解稀释至2mg/mL，加入2mL2mg/mL的草甘膦抗体（或2mL2mg/mL第二种属动物蛋白），混匀（5min），最后加入10%BSA2mL，混匀（5min）。离心三次留沉淀，此三次收集的沉淀即为金标草甘膦抗体。

胶体金标记部分处理：将草甘膦抗体稀释后，按一定比例将载体（如玻璃纤维、聚酯膜等）浸透，铺均匀，取出放于37℃恒温烘箱烘制8-12h，干燥后即作为胶体金标记部分。

2.免疫层析专用高分子复合膜制备

首先用一种硝酸纤维素膜制成透明背衬膜，在背衬膜上覆盖一层对蛋白质结合力强，浸润性能好的具有一定孔径的层析膜。背衬膜的作用是阻止粘合剂中的有机溶剂对层析膜上蛋白质的破坏。

3.层析膜的点样方法

将一定浓度的甜蜜抗原（草甘膦与载体物质形成的偶合物）精确定量；以一定间距（5mm）呈横条状点定于层析膜上，供检测用。