[发明专利]甲萘威胶体金试纸条的制备及使用方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及食品中甲萘威药物残留的一种快速胶体金试纸条的制备及使用方法。

背景技术

甲萘威又名西维因，一种氨基甲酸酯杀虫剂。工业产品为白色固体，纯品熔点142℃，在水中溶解度极小,在多数有机溶剂中溶解度不大，易溶于极性有机溶剂，化学性质稳定，但遇碱易分解。毒性较低,急性毒性LD50值:对大白鼠经口为500～850mg/kg。用于稻、棉、果林茶桑等作物上的螟虫、稻纵卷叶螟、稻苞虫、棉铃虫、红铃虫、斜纹夜蛾、棉卷叶虫、桃小食心虫、苹果刺蛾、茶小绿叶蝉、茶毛虫、桑尺蠖、大豆食心虫等。

甲萘威的检测方法有薄层色谱法，气-质联机和高效液相色谱法，由于以上诸分析法样品前处理比较复杂，操作时需专门的技术人员、检测费用昂贵，不利于推广应用。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性强，灵敏度高，且操作简单方便，对样品经过简单处理即可检测的甲萘威快速试纸半定量检测方法。

本发明的目的可通过以下技术方案来实现

甲萘威胶体金试纸条检测方法其技术要点是：试纸的背衬上依次贴有样品垫和金标垫和硝酸纤维素膜和吸水吸水纸，金标垫上被标记的物质为第二种属动物蛋白与甲萘威抗原的混合物或第二种属动物蛋白与甲萘威抗体的混合物；硝酸纤维素膜上包被有甲萘威抗体1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG1条作为参考线或包被有甲萘威抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的工IgG1条作为参考线。在试纸制备时通过调节检测线和参考线包被物的浓度，控制检测时检测线和参考线的显色深浅，并将其显色深浅与标准物质浓度对应起来，达到半定量检测。

所述的检测用抗原是指甲萘威与载体物质明胶形成的偶合物，免疫用抗原是指甲萘威与载体物质匙孔血蓝蛋白（KLH）形成的偶合物。

所述的载体物质也可以选用其他大分子物质，如：脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵清白蛋白等，但要求检测用抗原与免疫用抗原的载体无交叉免疫反应。

所述的第二种属动物蛋白指非抗体来源属动物的蛋白，例如，抗体为兔源性，则第二种属动物蛋白可以是卵清白蛋白、猪血清白蛋白等鸡、鸭或其他非兔源性动物蛋白。

本发明所描述的试纸的各部分处理与功能如下：

背衬：为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用；

样品垫制备：将滤纸或玻璃纤维纸浸入pH7.0-8.4的PBS中约莫2min，取出，80℃烘干或其他方式干燥，即作为样品垫，检测时起吸收样品溶液的作用，便于样品溶液向上移动；

金标垫的制备：该部分起固定胶体金标记的抗原或抗体的作用；

制备步骤包括胶体金溶液的制备、胶体金标记甲萘威抗原或甲萘威抗体。

（1）胶体金溶液的制备：将氯金酸（HAuCl₄）用超纯水配制成1%的母液，取1mL的母液，用超纯水定容至100mL，配成0.01%的溶液，加热至沸腾，加入1–5mL1%的柠檬酸三钠水溶液，继续加热至出现透明的橙红色为止，即为胶体金溶液。

（2）胶体金标记甲萘威抗原：将甲萘威抗原和第二种属动物蛋白分别用PBS（0.01mo1/L，pH7.0-7.5）溶解稀释至2-4mg/mL，每100mL胶体金溶液加入1-3mL的2-4mg/mL的检测用抗原1-1.5mL2-4mg/mL第二种属动物蛋白震荡2min，用0.2mol/L的K₂CO₃，调节pH至8.4，震荡5min加入11%PEG-100002mL，震荡5min，6000-13000r/min离心15min，除去上清，将沉淀用PBS（0.0lmol/L，pH7.0-7.5）复溶，以8000-15000r/min离心15min，除去上清，将沉淀用PBS（0.0lmol/L，pH7.0-7.5）释500-2000倍产物作为金标记甲萘威抗原。