[发明专利]一种抗恶性黑色素瘤疫苗组合物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，涉及一种抗恶性黑色素瘤疫苗组合物及其应用。

背景技术

恶性黑素瘤是一种恶性程度极高、易转移、预后差、对化疗放疗均不敏感、病死率极高的恶性肿瘤。本病主要发生在皮肤，占皮肤恶性肿瘤的第三位。随着现代肿瘤免疫学的迅速发展，针对恶性黑素瘤发生、发展及转移机制所进行的免疫治疗已成为目前研究的热点。虽然恶性黑素瘤对放化疗不敏感，但它是免疫原性较高的肿瘤，因此肿瘤疫苗及免疫因子治疗被广泛应用。但是应用灭活的肿瘤细胞或将其破碎后用作瘤苗治疗恶性黑素瘤苗治疗恶性黑素瘤时，由于肿瘤的免疫原性太低，不足以诱导机体产生有效的抗肿瘤免疫反应，可见恶性黑素瘤的特异性及免疫反应弱，不能有效地诱导或激活患者的免疫反应。

因此，目前存在的问题是如何增加恶性黑色素肿瘤疫苗的特异性抗肿瘤免疫反应。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种抗恶性黑色素瘤疫苗组合物，该疫苗组合物可以较好的激发自体内特异性T细胞增殖，并对目标恶性黑色素瘤细胞具有极强的特异性杀死功能，该疫苗组合物使用方便，治疗效果好，具有很好的应用前景。

为此，本发明第一个面提供了一种抗恶性黑色素瘤疫苗组合物，其由抗原混合物与树突状细胞培养物混合培养制成，其中所述抗原混合物包括恶性黑色素瘤抗原以及结核病抗原和/或棒状小体。

根据本发明，所述抗原混合物与树突状细胞培养物的体积比为2-1：1；优选抗原混合物与树突状细胞培养物的体积比为1：1。

在本发明的一些实施方式中，在所述抗原混合物中，所述恶性黑色素瘤抗原的含量为80％-100％(体积)，结核病抗原的含量为0-20％(体积)，棒状小体的含量为0-20％(体积)。优选在所述抗原混合物中，所述恶性黑色素瘤抗原的含量为80％-98％(体积)，结核病抗原的含量为2％-10％(体积)，棒状小体的含量为2％-10％(体积)。进一步优选在所述疫苗组合物中，所述恶性黑色素瘤抗原的含量为93％(体积)，结核病抗原的含量为5％(体积)，棒状小体的含量为2％(体积)。

本发明中，在所述抗原混合物中结核病抗原和棒状小体可以同时与恶性黑色素瘤抗原形成混合物也可以分别与恶性黑色素瘤抗原形成混合物。优选同时与恶性黑色素瘤抗原形成混合物。

根据本发明，所述恶性黑色素瘤抗原包括恶性黑色素瘤弱毒细胞和/或其恶性黑色素瘤弱毒细胞修饰体。

本发明中，所述恶性黑色素瘤弱毒细胞修饰体是由恶性黑色素瘤细胞经2,4-二硝基苯修饰并经灭活或破碎处理后获得。所述恶性黑色素瘤弱毒细胞由恶性黑色素瘤细胞经灭活或破碎处理后获得。

在本发明的一些实施例中，所述恶性黑色素瘤细胞包括B16细胞或M3细胞。

在本发明的一些实施例中，所述树突状细胞培养物由树突状细胞在含有GM-CSF、IL-4及胎牛血清的RPMI1640中，在5％CO₂、37条件下培养6天获得。

在本发明的另一些实施例中，所述混合培养的培养条件是在含有GM-CSF、IL-4及胎牛血清的RPMI1640中，在5％CO₂、37条件下培养1天。

在本发明的一个实施例中，所述述结核病抗原为卡介苗。

本发明第二个方面提供了一种根据本发明第一个方面所述的疫苗组合物在制备预防和治疗恶性黑色素瘤的药物中的应用。

在本发明的一些具体实施方式中，本发明的第一个方面所述的疫苗组合物按照以下方式进行制备：

步骤A，向DC中加入含GM-CSF(800U/mL)、IL-4(500U/mL)及5％胎牛血清的RPMI1640，在5％CO₂、37℃条件下培养6天制得含有DC培养物的培养液；

步骤B，向含有DC培养物的培养液中加入含有结核病抗原、恶性黑色素瘤抗原和棒状小体的抗原混合物继续培养24小时，制得含有抗恶性黑色素瘤疫苗组合物的培养液；

步骤C，收集抗恶性黑色素瘤疫苗组合物细胞，并用流式细胞仪鉴定细胞表型。