[发明专利]一种N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的检测试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的检测试剂。

背景技术

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是细胞内溶酶体水解酶之一，分子量为140000。血液中的NAG不能通过肾小球滤膜，因此NAG在肾单位中含量较高，尤其是在近曲小管上皮细胞中。研究表明，NAG在糖尿病、高血压肾小管早期损伤、药物肾毒性以及感染、休克、肾移植排异反应等造成的急性肾小管损害中具有重要的检测价值，也是环境肾毒性物质对人群影响的排查手段之一。

目前，NAG测定是应用率最高的尿液酶学诊断项目，其对肾小管损伤的反应很灵敏，此外，用尿液作为标本，是一种无创伤检查，适合于日常检验和连续动态分析，也便于人群筛查的应用。NAG在临床应用中的测定方法主要包括放免分析法、荧光分析法和紫外-可见分光光度法等，其中，分光光度法以合成色原底物为方法学主流。在NAG的作用下，底物发生分解，通过测定底物的分解产物在特定波长下的吸光度来判断NAG的浓度。但目前的底物普遍存在着稳定性欠佳、灵敏度度等缺点。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明提供了一种底物稳定、灵敏度高、方便检测的试剂。

本发明通过以下技术方案实现：

一种N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的检测试剂，所述检测试剂由试剂A和试剂B两个试剂组成，其特征在于，

所述试剂A包括以下浓度的组分：

PH＝7.0～8.0的缓冲液        50～200mmol/L

稳定剂                      0.5～10g/L

防腐剂                      0.5～2g/L；

所述试剂B包括以下浓度的组分：

所述底物具有以下的结构通式：

作为优选，所述试剂A与试剂B混合后，混合液中的组分具有以下浓度：

作为优选，所述缓冲液选自PBS缓冲液、TRIS缓冲液、PIPES缓冲液、GOOD’S缓冲液、CAPS缓冲液、HEPES缓冲液中的一种。

作为优选，所述稳定剂选自EDTA、EDTA-2Na、乙二醇、亚氨基二乙酸中的一种。

作为优选，所述防腐剂选自NaN₃、对羟基苯甲酸甲酯、4-氯-3,5-二甲基苯酚中的一种。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的检测试剂的稳定性好，各项检测指标符合标准，灵敏度高，使用方便。

附图说明

图1为本发明实施例1中底物分解前与分解后的试剂的吸收光谱图。

具体实施方式

下面结合附图与实施例，对本发明做进一步阐述，但本发明并不仅限于以下实施例。

本发明的检测试剂的检测原理如下：

本发明的试剂B中的底物，可以被N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)分解，分解产物是取代巯基吡啶和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖，通过分光光度计检测取代巯基吡啶的吸收峰强度，可以得到被分解的底物的浓度，进而得到NAG的活性，判断NAG是否偏高。

本发明的检测试剂分为试剂A和试剂B，其中试剂B中溶有底物，操作步骤如下：

1)配制试剂A和试剂B，准备尿液标本。

2)取尿液标本10μl、试剂A150μl，混匀，在37℃下孵育3～5分钟。

3)在步骤2)中的混合液中加入试剂B50μl，混匀，在37℃下孵育60秒，使用分光光度计在测定波长下，连续监测1～3分钟混合液吸光度A，计算样品的△A/min。

4)用校准品定标，NAG(U/L)＝样品的△A/min×校准品浓度。

实施例1

配制检测试剂，其中试剂A具有以下浓度的组分：

PH＝7.0的PBS缓冲液       50mmol/L

乙二醇                   2g/L

NaN₃                     1g/L；

所述试剂B包括以下浓度的组分：

所述底物具有以下的结构式(以下简称3-Cl-5-TFMPT-NAG)：

按照实施方式中的操作步骤，对实施例1中的检测试剂进行进行处理，对处理后的试剂进行检测，检测波长390nm，实验结果如下：

1)空白吸光度：