[发明专利]一种猪冷冻精液保藏方法

权利要求书

1. 一种猪冷冻精液保藏方法，其特征在于包括如下步骤：

对采集精液稀释后降温到17℃，测量精子密度，离心后测量上清液精子密度，等温下加入冷却保护液稀释，稀释液计算公式为式（I）所示：

稀释液总量=（稀释后精子密度－上清液精子密度）×体积/7亿                       （I），

进一步降温到4~5℃，再加入冷冻保护液进封装冷藏；根据冷冻曲线降温恒定到-120℃后，储藏在液氮罐中；

所述冷冻曲线的过程是：从4~5℃以2℃/min的降温速度降温至-5℃，再以60℃/min降温速度降温至-140℃，然后回到-120℃维持10min。

2. 根据权利要求1所述的一种猪冷冻精液保藏方法，其特征在于：采集精液的稀释步骤为：

取1000ml无菌双蒸水水浴锅中加热至30~38℃，再加入原精稀释液粉溶解获得原精稀释液，稳定1小时待用；采集精液、原精稀释液按1：0.5的比例等温稀释，放入17℃冰箱中平衡40分钟。

3. 根据权利要求1或2所述的一种猪冷冻精液保藏方法，其特征在于：将稀释后精液降温到17℃后立即进行离心，17℃等温环境下，800g离心12.5min，并吸除上清液。

4. 根据权利要求1所述的一种猪冷冻精液保藏方法，其特征在于：加冷却保护液稀释后的体积为最终体积的一半，加完稀释液后，于4℃环境下降温平衡，1h后水杯中加冰块或周围加冰袋促使其快速降温至4-5℃；0.5h后等量等温加入冷冻保护液，加入后平衡45分钟装管。

5. 根据根据权利要求1所述的一种猪冷冻精液保藏方法，其特征在于：封装时利用细管容纳冷藏精液，水平放置，封口后将管内气泡晃动到管中央。

6. 根据根据权利要求1所述的一种猪冷冻精液保藏方法，其特征在于：冷冻采用将容纳有冷冻精液的细管置于液氮上方的方式，通过控制与液氮液面的距离，在-80℃~-120℃之间调节，8min后投入液氮获得冻精。