[发明专利]一种检测动物源食品中甲巯咪唑残留的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种检测甲巯咪唑的酶联免疫试剂盒，其特别适用于动物源食品中甲巯咪唑残留的检测。

技术背景

甲巯咪唑是甲亢的常用治疗药物，能改变动物体内的内分泌，动物在饲用含甲巯咪唑的饲料后，在尿液、鸡肉和组织中会有不同程度的残留，欧盟等国家已明确将其列入动物园食品中禁用药物。目前，激素类物质已被大部分国家禁止在养殖业中使用，并不得在食品中检出。但国内对畜产品中甲巯咪唑等违禁药物残留的检测几乎是空白，根据我国对动物源产品残留监控规定及有关进口国的要求，研究各种检测方法已成为当务之急。

目前，检测甲巯咪唑残留量的方法主要是高效液相色谱法(HPLC)，由于复杂的仪器设备和繁琐的过程以及对检验人员的高技能要求，不适合现场监控和大量样本的筛查。

发明内容

本发明的目的在于针对上述不足提供一种用于动物源食品中甲巯咪唑残留检测酶联免疫试剂盒，其操作简单适合现场大批量样品的筛选。

本发明试剂盒，它含有：

(1)包被有包被原的酶标板(包被原为抗原、抗体或抗抗体)；

(2)酶标记物(为酶标记半抗原、酶标记抗体或酶标记抗抗体)；

(3)甲巯咪唑抗体工作液(当酶标板上包被抗原且酶标记物为酶标记抗抗体或酶标板上包被抗抗体且酶标记物为酶标抗原时含有)；

(4)甲巯咪唑标准品溶液；

(5)底物显色液；

(6)终止液；

(7)浓缩洗涤液；

(8)浓缩复溶液；

本发明提供的检测甲巯咪唑残留量的酶联免疫试剂盒，包括甲巯咪唑特异性抗体工作液及预包被包被原的酶标板和酶标记物工作液，所述酶标记物为酶标记的抗抗体，酶标记甲巯咪唑半抗原或酶标记甲巯咪唑特异性抗体；所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体或羊抗兔抗抗体。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶，酶标记的羊抗鼠抗抗体是采用混合酸酐或碳化二亚胺法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的。

所述甲巯咪唑特异性抗体为甲巯咪唑单克隆抗体，他们均是用甲巯咪唑半抗原与载体蛋白采用混合酸酐法得到的偶联物作为免疫原得到的，所述甲巯咪唑单克隆抗体优选甲巯咪唑鼠单克隆抗体。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括甲巯咪唑标准品溶液、显色剂、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液。

所述洗涤液优选浓缩洗涤液为pH7.1~17.7，含有0.8%~1.2%吐温80和0.03~10.05%硫柳汞防腐剂，0.02~10.04mol/L磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。

当酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶，底物显色液A为过氧化氢或过氧化脲，底物显色液B为邻苯二胺或四甲基联苯胺，终止液为1~2mol/L硫酸或盐酸缓冲液；

所述复溶液为含有0.08~10.12%吐温20、3~18%卵清蛋白、0.2~0.5mol/L磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。

本发明中酶标板的制备过程为用缓冲液将包被原稀释成0.2~0.3μg/ml，每孔加入100μL，37℃温育2h或4℃过夜，倾去包被液，用稀释后的洗涤液洗涤两次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入150~200μL封闭液，37℃温育1~2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空密封保存。

本发明中抗原的合成过程：

1.半抗原的合成

甲巯咪唑半抗原是将孕酮和琥珀酸酐通过反应得到的

2.甲巯咪唑抗体的制备

将甲巯咪唑半抗原与载体蛋白采用碳化二亚胺法进行偶联得到免疫原

本发明所述试剂盒中甲巯咪唑标准品溶液；标注品溶液6瓶，为0μg/L，0.3μg/L，0.9μg/L，2.7μg/L，8.1μg/L，24.3μg/L。

本发明的检测原理为：

当在微孔条上预包被甲巯咪唑抗原时，加入样本溶液或标准品溶液后，随即加入酶标二抗，再加入甲巯咪唑特异性抗体溶液，样本中残留的甲巯咪唑与酶标板上包被的甲巯咪唑抗原竞争孕酮特异性抗体，酶标记抗抗体进行放大作用，用显色液显色，样本吸光值与甲巯咪唑的含量成负相关，与标准曲线比较可粗略判断样品中甲巯咪唑残留量的浓度范围。

本发明还提供了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测动物源食品中甲巯咪唑残留的方法，它包括步骤：

(1)样品前处理；

(2)用试剂盒进行检测；

(3)分析检测结果。