[发明专利]一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域，具体涉及一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用及制备方法。 

背景技术

随着生物技术的不断发展，灭活疫苗的安全性已经得到了极大提高，但基于重组抗原或纯化病原体亚单位发展而来的DNA或者多肽作为疫苗时，免疫原性很弱，限制了此类疫苗的使用，因而需免疫佐剂来提高此类抗原的体液或细胞免疫应答效果。传统的免疫佐剂毒性作用较大，亟需要开发更加安全、有效的新型免疫佐剂来提高新一代生物疫苗的免疫效果。 

免疫佐剂，别称非特异性免疫增生剂，本身不具有抗原性，当同抗原一起注射或提前注射到机体后，能够增加抗原的免疫原性或者改变免疫类型。按照习惯和来源将佐剂分为四类：传统免疫佐剂，如铝盐佐剂，明矾佐剂，油乳佐剂和弗氏佐剂等； 细胞因子免疫佐剂，如白细胞介素-2和干扰素；天然来源免疫佐剂，如多糖佐剂，黄酮佐剂，皂苷佐剂以及蜂胶佐剂；新型免疫佐剂，包括免疫刺激复合物佐剂，CpG ODN佐剂，脂质体佐剂和纳米佐剂等。 

不同的佐剂引起的免疫增强作用不尽相同，但作为一种良好的佐剂，必须具备：（1）无毒且副作用低，无免疫原性；（2） 直接或间接激活免疫活性细胞并引起免疫细胞增生，增强免疫效果；（3）增加抗原的表面积并保护抗原，减低抗原在体内的降解。 

针对现有的免疫佐剂，分析如下：首先，现有的新型免疫佐剂多数不带正电荷，而一定的电荷是刺激免疫细胞应答与增强抗原呈递的必要物理条件；其次，免疫佐剂的安全性要高、免疫原性要低。实验室用的弗氏佐剂由于其副作用限制了广泛使用。最后，作为免疫刺激的辅助增强剂，成本要尽可能低。生物重组蛋白类或者DNA类抗原的成本正在逐渐降低，而免疫佐剂的生产成本也需相应的得打改良。 

纳米胶束，作为高分子聚合物纳米颗粒的一种，直径一般不大于100 nm，用于基因药物和传统化疗药物的载体，正逐渐成为药物纳米化制剂研究的新方向。在形成纳米胶束的聚合物中，引入阳离子聚合物嵌段，可以改变胶束的表面电荷，用于DNA或者多肽分子的缓控制释放；同时，阳离子胶束能够刺激呈递抗原的树突状细胞（dendritic cells,DC）,提高机体对其所递送抗原的免疫应答和有效记忆性免疫。 

发明内容

为了解决现有技术的缺点，本发明利用生物相容性良好的聚乙二醇-聚己内酯作为合成的骨架分子，引入带正电核的小分子聚合物聚乙烯亚胺，利用亲疏水相互吸引的作用形成纳米化的阳离子聚合物体系，发明了本发明涉及免疫学领域，具体涉及一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用及制备方法。 

一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：

（1）将无水聚乙二醇单甲醚加入容器中，称取己内酯，滴入0.5% w/w的辛酸亚锡，油浴加热至120-160℃，搅拌并氮气保护条件下反应4-12h，真空冷却，加入二氯甲烷溶解反应混合物，用提前预冷的石油醚反复沉淀并洗涤，得到MPEG-PCL；

（2）将制得的MPEG-PCL干燥并用无水二氯甲烷溶解，先加入5滴三乙胺后，逐滴加入丙烯酰氯，在35℃、无水、氮气保护条件下反应4-8小时，用石油醚沉淀得含有碳碳双键的MPEG-PCL；

（3）将含有碳碳双键的MPEG-PCL溶解于二氯甲烷中，滴入过量的聚乙烯亚胺的二氯甲烷溶液，在45℃、磁力搅拌条件下，反应24小时以上，用预冷的石油醚沉淀数次后，烘干、透析纯化反应产物，冷冻干燥后得到MPEG-PCL-PEI三嵌段聚合物。

所述的一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，所述的步骤（1）中己内酯与聚乙二醇单甲醚的摩尔比为1.2:1。 

所述的一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，所述的步骤（2）中丙烯酰氯与MPEG-PCL的摩尔比1.2:1。 

所述的一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，所述的步骤（3）中滴入过量的聚乙烯亚胺的二氯甲烷溶液与含有碳碳双键的MPEG-PCL物质的量之比大于1。 

所述的一种阳离子聚合物纳米免疫佐剂的制备方法，其特征在于，所述的MPEG-PCL-PEI三嵌段聚合物中MW_MPEG=5000，MW_PCL=2000，MW_PEI=2000。 

一种阳离子聚合物作为制备纳米免疫佐剂的应用，所述的阳离子聚合物为MPEG-PCL-PEI三嵌段聚合物。 

本发明合成路线：