[发明专利]一种钙螯合肽的制备方法

权利要求书

1.一种制备钙螯合肽的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步骤：

1)磷酸化胶原的制备，首先用磷酸化剂对胶原蛋白溶液在70～85℃进行磷酸化，磷酸化时间为1～4h；在磷酸化过程中利用高压脉冲电场进行处理，条件为400～600个脉冲，脉冲时间50～200μs，频率50～250Hz；

2)纯化与脱盐：将磷酸化处理后的胶原蛋白溶液利用饱和硫酸铵溶液进行盐析，加入饱和硫酸铵溶液直至硫酸铵终浓度为35％，静置30～60min后离心，沉淀物用饱和度为75％的硫酸铵洗涤，离心得到沉淀；将沉淀用水溶液后，利用膜截留分子量为1000～3000道尔顿的聚砜超滤膜进行脱盐，得到脱盐的磷酸化胶原蛋白溶液；

3)酶解：在制得的脱盐磷酸化胶原蛋白溶液中加入Alcalase与胰蛋白酶复合酶系进行酶解，酶解反应温度50～60℃，调节脱盐磷酸化胶原蛋白溶液的pH为8～9，搅拌速度50～300rpm，反应时间0.5～5h，酶解结束后干燥溶液得到磷酸化胶原蛋白肽。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中的胶原蛋白的质量体积百分比浓度为0.5～5％，pH为6～9。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中磷酸化剂用量为胶原蛋白质量的1/4～1/2。

4.如权利要求1或3所述的方法，其特征在于，所述的步骤1)中磷酸化剂为三聚磷酸钠和/或三偏磷酸钠。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的磷酸化剂为三聚磷酸钠，或三聚磷酸钠和三偏磷酸钠的混合物，其中三聚磷酸钠含量为85～99％，三偏磷酸钠为1～15％。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中的复合酶系添加在胶原蛋白溶液中的浓度为0.2～2g/L。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中的复合酶系中Alcalase与胰蛋白酶的质量比为1:4。

8.一种钙螯合肽，其特征在于，所述的钙螯合肽是用权利要求1所述的方法制备的。

9.一种钙离子螯合产物，其特征在于，所述的钙离子螯合产物是用权利要求8所述的钙螯合肽螯合钙离子制备的。

10.权利要求9所述的钙离子螯合产物的制备方法，其特征在于，所述的方法步骤如下：在磷酸化胶原蛋白肽溶液中加入钙离子，磷酸化胶原蛋白与钙离子质量比为3～1:1，反应条件为：温度50～70℃，pH为4～8，反应时间1～3h；得到与钙离子结合的磷酸化胶原蛋白肽。