[发明专利]检测猪流行性乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因芯片以及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测猪流行性乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因芯片以及试剂盒。

背景技术

多病原混合感染是当前猪场疫病的普遍现象，猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪流行性乙型脑炎这三种猪病毒引起的疾病症状相似且常常呈混合感染,是当前危害养猪业的3种重要病毒性疾病，因此早期鉴别诊断并及时了解流行状况对控制这3种病的流行显得尤其重要。目前对这3种病的诊断多采用病原的分离及常规的血清学方法，但需时间较长。最近国外和国内均建立了病原的分离鉴定、免疫胶体金技术、酶联免疫吸附试验、血清中和实验、聚合酶链反应等，但是还不能更加快速的检测多种病原的混合感染。

基因芯片技术是近年来新兴起的一种生物高新技术，该技术可以同时定量或定性的检测成千上万个基因信息，具有无选择性、客观、高通量的特点。基因芯片计划开展后,许多部门、大学、重点实验室及制药公司参与了该项目的研发,我国相继也成立了一大批基因芯片公司。随着基因组数据的增长以及分子生物学相关学科的快速发展,基因芯片技术得到迅猛发展和广泛应用。但生物芯片技术发展时间较短，很多技术还处于初级研发阶段，要成为实验室研究或临床可以普遍采用的技术仍有诸多关键问题亟待解决。(1)基因芯片的特异性的提高；(2)增加信号检测的灵敏度；(3)简化样品制备和标记操作；(4)设备与操作人员的要求较高；(5)应用标准的统一。

目前，昊时友等，“猪病毒性繁殖障碍综合征基因芯片诊断方法的建立”，中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会，2007年公开了检测日本乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒等6种病毒的基因芯片，但是该文件中没有芯片灵敏度试验，不能说明其可以灵敏地检出乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新的特异性强、灵敏度高的可同时检测猪流行性乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因芯片和试剂盒。

本发明检测猪流行性乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，SEQ ID NO：3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，以及SEQ ID NO：5或6所示任意一个或者两个寡核苷酸片段。

基因芯片，是指指通过不同方法将生物分子(寡核苷酸、cDNA、genomic DNA、多肽、抗体、抗原等)固着于硅片、玻璃片(珠)、塑料片(珠)、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的生物分子点阵，其突出的特点是微型化、集成化、平行化和高通量。

优选地，它还包括定位探针，定位探针是SEQ ID NO：19所示的基因片段。

本发明检测猪流行性乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，它包括前述的基因芯片与扩增猪流行性乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因的试剂，其中，扩增猪流行性乙型脑炎病毒的试剂包括SEQ ID NO：7～8和/或SEQ ID NO：9～10所示引物对；扩增猪瘟病毒基因的试剂包括SEQ ID NO：11～12和/或SEQ ID NO：13～14所示引物对；扩增猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒基因的试剂包括SEQ IDNO：15～16和/或SEQ ID NO：17～18所示引物对。

优选地，所述引物对中，SEQ ID NO：7、9、11、13、15、17所示上游引物与SEQ ID NO：8、10、12、14、16、18所示下游引物的摩尔比分别为50:1、40:1、80:1、80:1、20:1、10:1。

SEQ ID NO：7～8、SEQ ID NO：9～10、SEQ ID NO：11～12、SEQ ID NO：13～14、SEQ ID NO：15～16和SEQ ID NO：17～18所示引物对以及SEQ ID NO：1～6所示寡核苷酸片段。

SEQ ID NO：1或2所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，SEQ ID NO：3或4所示任意一个或者两个寡核苷酸片段，以及SEQ ID NO：5或6所示任意一个或者两个寡核苷酸片段在制备检测猪流行性乙型脑炎病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因芯片中的用途。优选地，它还包括定位探针，定位探针是SEQ ID NO：19所示的基因片段。