[发明专利]一种人松弛素H2前体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组人松弛素H2前体，使用人工C肽将人松弛素H2的B链和A链按B-C-A顺序连接，其特征在于所述的人工C肽具有SEQ ID NO 1-4任一项所示的氨基酸序列，人松弛素H2前体为如下任一条所示的序列：

MGHHHHHHHHHHSSGRDSWMEEVIKLCGRELVRAQIAICGMSTWSRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQSRQLYSALANKCCHVGCTKRSLARFC；

MGHHHHHHHHHHSSGRDSWMEEVIKLCGRELVRAQIAICGMSTWSRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQGRQLYSALANKCCHVGCTKRSL ARFC；

MGHHHHHHHHHHSSGRDSWMEEVIKLCGRELVRAQIAICGMSTWSRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQVRQLYSALANKCCHVGCTKRSLARFC；

MGHHHHHHHHHHSSGRDSWMEEVIKLCGRELVRAQIAICGMSTWSRREAEDLQVGQVELGGGPGAGSLQPLALEGSLQARQLYSALANKCCHVGCTKRSLARFC；

其中MGHHHHHHHHHHSSGRD为前导肽S序列。

2.一种寡聚核酸序列，其编码权利要求1所述的任一条人松弛素H2前体。

3.权利要求2所述的寡聚核酸序列，其特征在于具有SEQ ID NO 6 所示的核酸序列。

4.一种载体，其包含权利要求2或3所述的寡聚核酸序列。

5.一种宿主细胞，其包含权利要求4所述的载体或权利要求2或3所述的寡聚核酸序列。

6.权利要求1所述的重组人松弛素H2前体的制备方法，其包括培养权利要求5所述的宿主细胞和分离权利要求1所述的重组人松弛素H2前体的步骤。

7.权利要求1所述的人松弛素H2前体的制备方法，其特征在于：

1）获得重组基因：获得表达人松弛素H2前体的寡聚核酸序列，所述寡聚核酸序列具有权利要求2或3所示的序列；

2）获得重组载体：将步骤1）获得的寡聚核酸序列插入载体质粒，获得含有重组基因的重组载体；

3）获得基因工程菌：将步骤2）获得的重组载体转化宿主细胞获得基因工程菌；

4）表达外源基因：基因工程菌发酵表达重组人松弛素H2前体蛋白；

5）收集前体蛋白：裂解菌体，收集重组人松弛素H2前体蛋白；

6）纯化目的蛋白：通过蛋白酶酶切去除前导肽S、C肽，并经层析纯化步骤获得成熟的人松弛素H2蛋白。