[发明专利]提取雷帕霉素的方法

说明书

技术领域

本发明属于分离纯化技术领域，具体涉及一种提取雷帕霉素的方法。

背景技术

雷帕霉素，又名西罗莫司，属大环内酯类抗生素，是一种疗效好、低毒、无肾毒性的新型免疫抑制剂，它是从吸水链霉菌发酵液中提取得到的。

中国专利文献CN102070652A公开了一种从发酵液中分离提取西罗莫司的方法，包括将西罗莫司发酵液过滤或离心分离后得到菌丝体，然后经萃取、脱色、减压浓缩得到西罗莫司粗提物，接着进行高速逆流色谱分离，最后减压浓缩、干燥得到西罗莫司纯品。该方法需要采用价格昂贵的高速逆流色谱仪，导致生产成本较高，而且纯度较低，不到90%，从而不适于工业化大生产。

中国专利文献CN102372726A公开了一种西罗莫司粗晶的制备方法，包括将西罗莫司菌丝体的浸提液减压浓缩后加入固体吸附剂吸附，然后经萃取、洗涤、减压浓缩、洗涤、结晶、洗晶、干燥得到西罗莫司纯品。产物纯度为95%～98%，含量为77.4%～84.1%，收率为63.3%～72.3%。该方法采用硅藻土、硅胶等固体吸附剂进行吸附杂质，效果不佳，最终得到的西罗莫司含量和纯度均较低，收率也不高，同样不适于工业化大生产。

中国专利文献CN102443012A公开了一种从发酵液中提纯雷帕霉素的方法，包括将发酵液过滤后得到的菌丝体抽提后真空浓缩，同时将发酵液过滤后得到的上清液萃取分离后真空浓缩，将两个浓缩液合并后经大孔树脂吸附洗脱并真空浓缩，接着依次进行萃取、脱水、真空浓缩、柱层析、洗涤、洗脱、真空浓缩、结晶、真空浓缩、重结晶得到雷帕霉素纯品，纯品纯度为99.5%～99.6%，单杂小于0.1%，收率最高可达60%。其中大孔树脂吸附洗脱采用的大孔树脂为XP-5、DiaionHP20、SP825，大孔树脂与浓缩液的体积比为1∶5～1∶20，洗脱剂为丙酮和水的混合液，洗脱温度为15～35℃，洗脱pH为5.0～8.0。该方法采用大孔吸附树脂吸附可以有效提高雷帕霉素纯度，但是收率仍然较低。

关于在提取雷帕霉素的过程采用大孔吸附树脂，邓芸等在《沈阳药科大学学报》（2011年12月，第28卷第12期，第991-994页）公开了大孔吸附树脂在雷帕霉素分离纯化中的应用，该文献考察了X-5、D3520、AB-8、MN-200以及MN-202这五种大孔吸附树脂对雷帕霉素的吸附量，并且考察了甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷以及氯仿这六种洗脱剂对雷帕霉素的解析率，其中X-5大孔吸附树脂吸附能力最强，乙醇和二氯甲烷的洗脱能力最强。

另外，由上述文献可知，在提取雷帕霉素的过程中需要进行多次浓缩，而目前常用的浓缩为旋转蒸发浓缩或者升膜降膜浓缩，对于经大孔树脂吸附后洗脱收集的洗脱液，上述两种浓缩效果均不佳。

发明内容

本发明的目的在于解决上述问题，提供一种分离纯化效果较好的提取雷帕霉素的方法。

实现本发明目的的技术方案是：一种提取雷帕霉素的方法，具有以下步骤：①将含有雷帕霉素的发酵液过滤，滤饼用有机溶剂抽提后，再次过滤，滤液经浓缩后，得到第一浓缩液；②将步骤①得到的第一浓缩液经大孔吸附树脂柱吸附后，洗脱大孔吸附树脂柱，并将收集的洗脱液浓缩，得到第二浓缩液；③将步骤②得到的第二浓缩液萃取后再浓缩，得到第三浓缩液；④将步骤③得到的第三浓缩液经柱层析后再次洗脱，并将收集的洗脱液再次浓缩，得到第四浓缩液；⑤将步骤④得到的第四浓缩液结晶后，再重结晶，得到雷帕霉素。

上述步骤②中采用的大孔吸附树脂为AB-8大孔吸附树脂，洗脱采用的溶剂为丙酮。

上述步骤②中所述的浓缩为离心薄膜浓缩。

上述步骤②中的洗脱过程如下：先用体积分数为10%～30%的丙酮清洗大孔吸附树脂2～8个柱体积，然后再用体积分数为20%～50%的丙酮清洗大孔吸附树脂2～8个柱体积，接着用体积分数为30%～60%的丙酮清洗大孔树脂2～8个柱体积，直至TLC检测发现流出液中含有雷帕霉素，最后用体积分数为60%～90%的丙酮清洗大孔吸附树脂直至TLC检测发现流出液中不含雷帕霉素。

上述步骤②中的洗脱过程优选如下：先用体积分数为20%的丙酮清洗大孔吸附树脂5个柱体积，然后再用体积分数为35%的丙酮清洗大孔吸附树脂5个柱体积，接着用体积分数为50%的丙酮清洗大孔树脂5个柱体积，直至TLC检测发现流出液中含有雷帕霉素，最后用体积分数为80%的丙酮清洗大孔吸附树脂直至TLC检测发现流出液中不含雷帕霉素。