[发明专利]一种受产物抑制减弱的环糊精葡萄糖基转移酶突变体有效
| 申请号： | 201410506112.4 | 申请日： | 2014-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN104293743A | 公开（公告）日： | 2015-01-21 |
| 发明（设计）人： | 李兆丰;顾正彪;徐琪;李才明;洪雁;程力 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/75;C12N1/21;C12P19/18;C12P19/04 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 产物 抑制 减弱 环糊精 葡萄 糖基转移酶 突变体 | ||
1.一种环糊精葡萄糖基酶突变体，其特征在于，是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的环糊精葡萄糖基转移酶的第599位的丙氨酸突变为天冬酰胺，得到单突变体A599N。
2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，在得到单突变体A599N的基础上，将第633位酪氨酸突变为丙氨酸，得到双突变体A599N/Y633A。
3.编码权利要求1或2所述突变体的基因。
4.含有权利要求3所述基因的载体或细胞。
5.一种获得权利要求1所述突变体的方法，其特征在于，根据SEQ ID NO.1所示的基因序列，设计定点突变引物，对基因进行定点突变，获得编码突变体A599N的基因，并在枯草芽孢杆菌中进行表达。
6.一种获得权利要求2所述突变体的方法，其特征在于，根据SEQ ID NO.1所示的基因序列，设计定点突变引物，对编码突变体A599N的基因进行定点突变，获得编码双突变体A599N/Y633A的基因，并在枯草芽孢杆菌中进行表达。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB600为表达宿主。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，挑取含突变质粒的表达宿主B.Subtilis WB600的单克隆于LB培养基中，在37℃、200r/min下培养8～12h，以4％(v/v)接种量接种到TB培养基中，在37℃、200r/min下发酵24～48h；将发酵液于4℃、10000rpm离心20min以除去菌体，收集上清液并纯化，得到突变体酶制品。
9.一种减弱CGT酶产物抑制的方法，其特征在于，是将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的CGT酶的第599位丙氨酸突变为天冬酰胺，并得到单突变体A599N；或在单突变体A599N的基础上，进一步将第633位酪氨酸突变为丙氨酸，得到双突变体A599N/Y633A。
10.权利要求1或2所述环糊精葡萄糖基转移酶突变体在环糊精生产中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410506112.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种淀粉糖原的合成方法
- 下一篇：一种芦荟木瓜抗衰酒
