[发明专利]用于基于血液样品构建测序文库的方法及其在确定胎儿遗传异常中的用途

说明书

本发明提供了一种基于血液样品构建测序文库的方法、一种核酸测序方法、一种用于确定样品中胎儿遗传异常的方法、一种基于血液样品构建测序文库的装置、一种核酸测序设备以及一种用于确定样品中胎儿遗传异常的系统提供了一种基于血液样品构建测序文库的方法、一种核酸测序方法、一种用于确定样品中胎儿遗传异常的方法、一种基于血液样品构建测序文库的装置、一种核酸测序设备以及一种用于确定样品中胎儿遗传异常的系统。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体的，本发明涉及用于基于血液样品构建测序文库的方法及其在确定胎儿遗传异常中的用途。更具体的，本发明涉及提供了一种基于血液样品构建测序文库的方法、一种核酸测序方法、一种用于确定样品中胎儿遗传异常的方法、一种基于血液样品构建测序文库的装置、一种核酸测序设备以及一种用于确定样品中胎儿遗传异常的系统。

背景技术

高通量测序已经成为了现代分子生物学、生物技术、医学等多领域的基础之一。在近几年，对迅速、精确、经济的基因表达水平和核苷酸序列的测定方法的研究不断推陈出新；以边合成边测序为基本原理的第二代高通量测序技术已趋于成熟，各大测序公司纷纷将重点放在了新测序产品的开发、测序流程的缩短和成本降低上。目前已有的基于第二代测序技术的测序产品有全基因组重测序、全转录组测序、小分子RNA测序等。特别的，第二代测序结合微阵列技术而衍生出来的应用--目标序列捕获测序技术能够使用大量寡核苷酸探针与基因组上的特定区域互补结合，从而富集到特定区段，然后用第二代测序技术对这些区段进行测序，以实现人全外显子组测序(WES)。这种测序方式数据分析压力小，较之全基因组测序有明显优势。

然而，目前关于核酸测序的相关技术仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种基于血液样品构建测序文库的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：

从所述血液样品分离DNA样品；

对所述DNA样品进行去磷酸化处理以便获得经过去磷酸化的DNA；

对所述经过去磷酸化的DNA进行末端修复，以便获得双链DNA片段，其中，所述双链DNA片段具有两个平端末端，并且四个末端核苷酸均缺少磷酸基团；

将相互不同的第一和第二接头与所述双链DNA片段相连，以便获得第一连接产物，其中第一和第二接头的每一个均是分离的寡核苷酸，所述分离的寡核苷酸包括：第一链，所述第一链的5’末端核苷酸具有磷酸基团，并且所述第一链的3’末端核苷酸为双脱氧核苷酸；以及第二链，所述第二链的5’末端核苷酸不具有磷酸基团，并且所述第二链的3’末端核苷酸为双脱氧核苷酸，其中，所述第一链的长度大于所述第二链的长度，并且所述第一链和所述第二链之间形成双链结构；

利用第一单链DNA置换所述第一接头的第二链，利用第二单链DNA置换所述第二接头的第二链，以便获得第二连接产物，其中，第一单链DNA适于与第一接头的第一链形成双链结构，所述第二单链DNA适于与第二接头的第一链形成双链结构；

利用第一引物和第二引物对所述第二连接产物进行扩增，其中，所述第一引物包括与所述第一单链DNA和第二单链DNA之一相同的序列，所述第二引物包括与所述第一单链DNA和第二单链DNA的另一个相同的序列，并且所述第一引物和第二引物之一具有额外的生物素标记，所述扩增产物是在两个末端分别具有一个接头的DNA片段；

从所述在两个末端分别具有一个接头的DNA片段分离单链DNA片段；以及

将所述单链DNA片段进行环化处理，以便获得单链环状DNA，所述单链环状DNA构成所述测序文库。