[发明专利]用于结核分枝杆菌耐药突变基因检测的核酸膜条和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病病原体的基因检测，尤其涉及一种用于结核分枝杆菌耐药突变基因检测的核酸膜条和试剂盒。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)侵入人体后引起的一种具有强传染性的慢性消耗性疾病。自上世纪八十年代后期以来，受流动人口增加，艾滋病流行和耐药性结核病的增多等因素的影响，结核病在全球重新蔓延，已成为全球重大公共卫生问题和社会问题。据世界卫生组织2009年报告称：2007年，全球结核流行病例约为1370万例，其中新发病例共有927万起，高于2006年(924万例)、2000年(830万例)和1990年(660万例)的水平。2007年病例数排名前五位的国家是：印度(200万)、中国(130万)、印度尼西亚(53万)、尼日利亚(46万)和南非(46万)。

我国是结核病高负担国家之一，结核病病人数居世界第二位，仅次于印度。据我国卫生部门统计，目前全国共有结核病患者约450万人，其中新增结核病人130万，每年约13万人死于结核病。

结核分枝杆菌主要通过飞沫经呼吸道传染的，结核病人在咳嗽、打喷嚏或大声谈话时，结核分枝杆菌就会随痰沫喷出来，悬浮在空气中，人们吸入后可引起感染。结核病的治疗必须长期服用抗结核药物，至少6个月。当抗结核治疗中断或不规则治疗时，结核菌可以继续生存下去，不断繁殖，甚至形成一种更为危险的耐药性结核菌株，治疗起来更加困难。因此，对于结核病的防治要做到早期预防、及时发现和规范治疗。

利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素和氟喹诺酮是临床上最常用的抗结核药物，但患者长期服用或不规范治疗会导致结核分枝杆菌发生基因变异，对药物的敏感性降低，临床表现为结核耐药。WHO调查报告显示，2009年我国有结核病130万例，其中单耐药率21％，多耐药为8.64％，广泛耐药率为0.68％，总耐药率37.79％。中国耐药结核病的特点是耐药人数多，分布非常广泛，耐多药结核的分布以农村为主、青壮年占的比例较高，无明显性别差异，且东、中、西部不同地区耐药率并无显著差异。

研究表明当rpoB基因核心区域－利福平耐药决定区(RRDR)发生突变时，利福平不能有效的与RNA聚合酶β亚基结合，使得细菌对利福平产生耐受性；而异烟肼耐药的发生主要由katG或inhA基因突变引起，乙胺丁醇耐药主要由编码糖基转移酶(催化阿拉伯糖聚合到阿拉伯-半乳聚糖)的embB基因突变引起，链霉素耐药主要由编码核糖体蛋白S12(rpsL)基因突变引起，氟喹诺酮耐药主要是由gyrA基因突变引起。因此，检测相关耐药基因的突变情况可以获得结核分枝杆菌对相应药物的耐受性。

目前对于结核分枝杆菌的耐药常规检测方法是药敏培养法，该方法是将结核分枝杆菌菌株在含抗结核药物的培养基中进行培养，根据结核分枝杆菌在含药培养基中是否生长来判断结核分枝杆菌的耐药性。该方法的主要缺点是检测时间长，普通的药敏培养试验需要耗时6-8周才能报告最终结果，即使采用全自动药敏培养设备也需要3至4周才能报结果，极易耽误病人的最佳治疗时间。其次是药敏培养困难，对操作要求高，操作不当使细菌失活后容易产生假阴性，造成误判。

现有的检测结核分枝杆菌耐药基因相关位点突变的产品中，只是检测利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素和氟喹诺酮五种抗结核药物的一种或几种的耐药信息，检测不全面。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种可一次检测出结核分枝杆菌对物种抗结核药物的耐受性，且检测时间短、结果准确可信的用于结核分枝杆菌耐药突变基因检测的核酸膜条和试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：提供一种用于结核分枝杆菌耐药突变基因检测的核酸膜条，包括基底和固定于所述基底上的核酸探针，所述核酸探针包括如下碱基序列的探针：SEQ ID NO：1-26。

本发明的另一技术方案为提供一种用于结核分枝杆菌耐药突变基因检测的试剂盒，所述试剂盒包括：上述用于结核分枝杆菌耐药突变基因检测的核酸膜条和PCR反应液，所述PCR反应液包括PCR反应液Ⅰ和PCR反应液Ⅱ；

所述PCR反应液Ⅰ包括如下碱基序列的引物：SEQ ID NO：28-33；

所述PCR反应液Ⅱ包括如下碱基序列的引物：SEQ ID NO：34-39。