[发明专利]从山核桃外果皮中超临界分离纯化4,8-DHT的方法

说明书

技术领域

 本发明涉及4,8-二羟基-1-四氢萘酮提取，具体涉及从山核桃外果皮中超临界分离纯化4,8-二羟基-1-四氢萘酮的方法。

背景技术

4,8-二羟基-1-四氢萘酮（4,8-DHT），化学名4,8-dihydroxy-1-tetralone，无色细簇针状结晶,其中4位与羟基相连的碳为一个手性碳。4,8-DHT的左旋对映体(–)被称为regiolone，右旋对映体(+)被称为isosclerone。Regiolone最早是从青核桃中鉴定出的，可用于治疗皮肤瘙痒及痛等病症。Isosclerone最早是从Sclerotinia sclerotium中分离鉴定出，后来从一些真菌中也分离出了该化合物，它能引起葡萄灰色斑点病。山核桃外果皮中也含有4,8-DHT，是一个1:1外消旋体，熔点366-368K，溶于水、乙醇、丙酮及氯仿，[α]²⁰_D=±0° （c1.3, CH₂Cl₂）。目前公开了对山核桃外果皮中含有的4,8-DHT的鉴定，如用高效液相色谱法鉴定，一般用甲醇浸泡、回流提取山核桃外果皮提取物，再用色谱柱鉴定，4,8-DHT含量约0.036%左右。但未见从山核桃外果皮中分离纯化4,8-二羟基-1-四氢萘酮报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种从山核桃外果皮中超临界分离纯化4,8-DHT的方法，该方法杂质少，纯度高，提取效率较高。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：从山核桃外果皮中超临界分离纯化4,8-DHT的方法，步骤如下：

（1）将风干的山核桃外果皮粉碎，过45-60目筛，得到山核桃外果皮粉末；

（2）将山核桃外果皮粉末置于超临界萃取釜中，在萃取温度为25-35℃，CO₂流体压力为20-40MPa，夹带剂乙醇流速0.15-0.25 ml/min，萃取时间2 h，得到萃取物；

（3）萃取物用溶解量甲醇吸收为吸收液，吸收液用200-300目硅胶柱层析，依次用体积比2:1，1:1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，体积比2:1，1:1的石油醚与乙酸乙酯混合溶剂的用量都为5柱体积，流速5mL/min，每柱体积收集一瓶流份，共收集10瓶流份，将第4瓶流份减压浓缩，用乙酸乙酯结晶，得到4,8-二羟基-1-四氢萘酮无色晶体。

与现有技术相比，本发明的优点在于从山核桃外果皮中超临界分离纯化4,8-DHT的方法，通过超临界萃取釜萃取，得到萃取物，萃取物用甲醇吸收，硅胶柱层析，用石油醚和乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每柱体积收集一瓶流份，共收集10瓶流份，第4瓶流份减压浓缩，用乙酸乙酯结晶，得4,8-二羟基-1-四氢萘酮结晶化合物，该4,8-DHT为1:1外消旋体，杂质少，纯度为99.82%，提取率达到60%以上，该4,8-DHT外消旋体具有抑制植物种子萌发和幼苗生长的作用。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

一种从山核桃外果皮中提取4,8-二羟基-1-四氢萘酮的方法，先将风干的山核桃外果皮，粉碎，过45目筛为原料，称重100g，装入超临界萃取釜中；萃取温度为25℃，CO₂流体压力为30MPa，夹带剂乙醇流速0.15 ml/min，萃取时间2 h；萃取物用约25-ml甲醇吸收为吸收液，吸收液用200-300目硅胶柱层析，石油醚与乙酸乙酯混合溶剂（2:1，1:1）梯度洗脱，2:1石油醚和乙酸乙酯混合溶剂、1:1石油醚和乙酸乙酯混合溶剂用量都为5柱床体积，流速5mL/min，每柱体积收集一瓶，共收集10个流份，第4流份减压浓缩，残留物乙酸乙酯重结晶，得一无色小块状晶体22.5mg，测定为4,8-二羟基-1-四氢萘酮晶体，采用高效液相色谱法测定，得到纯度达到99.82%。

实施例2

与实施例1基本相同，所不同的只是萃取温度为30℃，CO₂流体压力为20MPa，夹带剂乙醇流速0.20 ml/min，，无色小块状晶体23.7mg。

实施例3

与实施例1基本相同，所不同的只是萃取温度为35℃，CO₂流体压力为40MPa，夹带剂乙醇流速0.25 ml/min，无色小块状晶体24.9mg。

实施例4