[发明专利]一种β-羰基羧酸酯还原酶的筛选方法

权利要求书

1.重组还原酶菌株E. coli CCZU-K14，保藏号为CGMCC No. 9298。

2.一种β-羰基羧酸酯还原酶的的高通量筛选方法，其特征在于按照下述步骤进行：

（1）称取重组E. coli CCZU-K14静息细胞（湿重）悬浮于磷酸缓冲溶液体系（pH 7.0，100 mmol/L）形成10% (质量浓度)的细胞悬液，加入终浓度为500-3000 mmol/L的底物β-羰基羧酸酯、750-4500 mmol/L的葡萄糖和50 μmol/L的NAD⁺混合均匀后在30℃、160 r/min 的条件下进行还原转化反应；

（2）反应结束，加入等体积乙酸乙酯萃取，显色是在24孔板中进行的；

萃取液：显色剂A（0.04 ~ 0.08 mol/L）：显色剂B（0.1 ~ 0.3 mol/L）=20:800:800（体积比），在20~35 ℃下显色反应15~30 min后取显色反应液至另一24孔板中，加入9倍体积的无水乙醇混合均匀，用紫外-可见分光光度计测其在510 nm波长下进行分析。

3.根据权利要求2所述的一种β-羰基羧酸酯还原酶的的高通量筛选方法，其特征在于显色剂A为FeCl₃、FeCl₂、Fe₂(SO₄)₃、FeSO₄、Fe(ClO₄)₃、CoCl₂或ZnCl₂中的一种。

4.根据权利要求2所述的一种β-羰基羧酸酯还原酶的的高通量筛选方法，其特征在于显色剂B为HCl或HClO₄中的一种。

5.根据权利要求2所述的一种β-羰基羧酸酯还原酶的的高通量筛选方法，其特征在于显色剂B为H₂SO₄中的一种。