[发明专利]一种清除水体有机污染物的转基因复合型水蕹菜的培育方法

权利要求书

1.一种清除水体有机污染物的转基因复合型水蕹菜的培育方法，其特征在于所述方法包括：(1)无菌苗的培养：将水蕹菜种子消毒后接种在1/2MS(0)培养基上，22±2℃，光照培养至萌发小苗，剪取靠顶端的带叶茎段作为外植体，然后将外植体转入含0.5～2.0mg/L 6-BA+0.25mg/L IAA的MS培养基上，22±2℃，光照培养，获得无菌苗；(2)侵染菌液：将含有核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示cyp2e1基因的质粒导入发根农杆菌，筛选得到抗性菌落；将抗性菌落活化后接种至含Km 50mg/L+Str 50mg/L的LB液体培养基中，28℃，200r/min培养至OD₆₀₀为0.4-0.6，离心，沉淀用MS液体培养基悬浮，离心去除清洗液后再用MS液体培养基悬浮，制成光密度OD值为0.1-0.2菌悬液，作为侵染菌液；(3)转基因植株的获取：将步骤(1)培育的无菌苗转入1/2MS(0)培养基上，22±2℃，光照培养至株高5.5-6cm时在植株的茎上刺出伤口，然后将步骤(2)制备的侵染菌液滴加在植株的伤口处，22±2℃，光照培养，在伤口处获得转基因毛状不定根；(4)转基因复合型植株：当步骤(3)获得的毛状不定根长达5-6cm时，将着生有毛状不定根的茎与原植株分离剪断并保留完整的毛状不定根的茎，然后将着生有毛状不定根的茎直接插入含质量浓度0.6％琼脂的1/2MS(0)的培养基中，22±2℃，光照培养10-15天，然后打开瓶盖练苗2-3天，取出洗去根部的琼脂，转移至1/2MS液体培养基中生长，即获得转基因复合型水蕹菜植株。

2.如权利要求1所述清除水体有机污染物的转基因水蕹菜的培育方法，其特征在于所述步骤(1)所述水蕹菜种子消毒方法为：将水蕹菜种子进入体积浓度0.1％氯化汞水溶液中，消毒7.5min。

3.如权利要求1所述清除水体有机污染物的转基因水蕹菜的培育方法，其特征在于所述步骤(1)所述无菌苗培养所用培养基为含0.5mg/L 6-BA+0.25mg/L IAA的MS培养基。

4.如权利要求1所述清除水体有机污染物的转基因水蕹菜的培育方法，其特征在于所述步骤(2)所述质粒为pSLD50-6。

5.如权利要求1所述清除水体有机污染物的转基因水蕹菜的培育方法，其特征在于所述步骤(2)所述发根农杆菌为发根农杆菌K599。

6.如权利要求1所述清除水体有机污染物的转基因水蕹菜的培育方法，其特征在于步骤(2)抗性菌落按如下方法制备：将含cyp2e1基因的质粒导入感受态发根农杆菌K599细胞，构建重组发根农杆菌K599/pSLD50-6。

7.如权利要求1所述清除水体有机污染物的转基因水蕹菜的培育方法，其特征在于步骤(3)所述带有伤口的植株按如下步骤获取：在无菌苗茎高1-5cm处用无菌针尖刺入，形成伤口。

8.如权利要求1所述清除水体有机污染物的转基因水蕹菜的培育方法，其特征在于所述水体有机污染物为苯或三氯乙烯。