[发明专利]一种虎奶菇多糖及其提取方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物的提取、分离和纯化领域，具体涉及一种虎奶菇多糖及其提取方法。

背景技术

虎奶菇[Pleurotus tuber-regium(Fr.)Sing.]，属于担子菌纲(Basidiomycetes)侧耳属，是热带地区一种珍贵的食用菌及药用菌，主要分布在我国云南省以及部分东南亚国家。担子菌纲的很多食用菌含有被称作生物应答调节剂(Biological Response Modifiers，BRMs)的生物活性多糖，如香菇多糖(Lentinan)、云芝多糖(Krestin)、裂褶菌多糖(Sizofiran)等。这些多糖因具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用，且没有毒性，而成为当前的研究热点。对虎乃菇多糖的研究表明，虎奶菇多糖亦是一种生物应答调节剂，能显著提高机体免疫功能，在医学、保健品、食品、药物载体等领域有良好的应用前景。

多糖是由二十多个到上万个单糖组成的大分子，在植物、动物、微生物广泛。多糖的分离纯化过程包括提取、分离、纯化和纯度鉴定。食用菌子实体的多糖，因细胞或组织外多有脂质包围，故常用醇或醚回流脱脂，然后利用不同的温度、极性、pH的溶剂提取多糖。此外，也可采用一些生化和物理的处理方法：如酶解、弱碱溶解或超声波处理以破坏细胞壁，增加多糖的溶出。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种产品回收率高、纯度好的虎奶菇多糖的提取方法。

本发明的另一目的在于提供上述提取方法得到的虎奶菇多糖。

本发明的目的通过下述技术予以实现：

一种虎奶菇多糖的提取方法，按照以下操作步骤：

(1)将自然风干的虎奶菇进行粉碎并过筛，得到虎奶菇干燥粉末；

(2)往虎奶菇干燥粉末中加入虎奶菇干燥粉末质量30～50倍的蒸馏水，在80～100℃下用输出功率为50～100W超声波萃取2～4h，离心5～20min，取上清液；离心后的虎奶菇固体残渣再加入其质量30～50倍的蒸馏水，重复上述超声波萃取操作3～5次，上清液合并，得到虎奶菇多糖提取液A；

(3)利用旋转蒸发仪在80～100℃下对虎奶菇多糖提取液A进行浓缩2～4h，得到虎奶菇多糖提取液B；

(4)将虎奶菇多糖提取液B的pH值调节至3～8，加入虎奶菇多糖提取液B质量0.5～2倍的木瓜蛋白酶，30～70℃下水解1～5h，沸水浴处理5～10min，得虎奶菇多糖提取液C；所述木瓜蛋白酶的活性为80000～100000U/g；

(5)往虎奶菇多糖提取液C中加入占其体积1/3的Sevag试剂，充分抽提0.5～3h，离心5～20min，取上清液；上清液继续用其1/3体积的Sevag试剂进行脱蛋白，充分抽提0.5～3h，离心5～20min最终获得的上清液为虎奶菇多糖提取液D；

(6)往虎奶菇多糖提取液D中加入占其体积3～5倍的乙醇，在0～25℃下醇析2～24h，离心10～20min，弃上清液并室温挥发干乙醇，得到多糖；再用多糖质量5～15倍的蒸馏水进行溶解，得到虎奶菇多糖提取液E；

(7)利用超滤膜将虎奶菇多糖提取液E进行超滤，收集分子量10000道尔顿以上的组分，再进行Sephadex G-100于25℃下进行柱层析得纯化多糖，收集多糖组分，冷冻干燥，得到虎奶菇多糖。

步骤(1)所述过筛是过50～120目筛。

步骤(4)所述pH值调节至4.5～7.2，所述木瓜蛋白酶的活性为80000U/g。

步骤(5)所述充分抽提的时间为0.5～1h；所述Sevag试剂为体积比为4：1的氯仿和正丁醇配制成的混合液。

步骤(6)所述乙醇是浓度为体积百分比95％的乙醇。

步骤(2)、步骤(5)和步骤(6)所述离心的速度为8000～12000转/分钟。

一种由上述提取方法得到的虎奶菇多糖。

本发明与现有技术相比具有如下的优点及有益效果：

(1)本发明提取方法产品回收率高、纯度好，虎奶菇多糖得率为1.8％，多糖的纯度为91.2％，其中主要含有葡萄糖(质量百分含量44.2％)、半乳糖(质量百分含量40.0％)。

(2)本发明工艺简单，所用试剂易得，生产成本低，易于实现工业化。

具体实施方式

下面结合具体的实例对本发明作进一步详细的叙述，但本发明的实施方法灵活，不仅仅限于此例所述的具体操作方式。

实施例1