[发明专利]一种猪肉中空肠弯曲杆菌的检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测领域，具体涉及一种猪肉中空肠弯曲杆菌的检测试剂盒及检测方法。

背景技术

猪肉是人们日常生活中的主要肉食品种，猪肉中微生物的含量是否达标直接关系到大家的饮食健康。空肠弯曲杆菌是猪肉类食品中最容易感染的微生物之一。它是引起全球人类及动物食源性细菌胃肠炎的主要原因，可引起急性肠炎及腹泻，报道显示，空肠弯曲杆菌感染占所有食源性细性菌感染的47%，能导致散发性和地方流行性胃肠炎爆发，尤其以恶性肿瘤、艾滋病、慢性疾病、儿童及老年人发病率最高，此外，还可引起格林巴利综合征（GBS），反应性关节炎、心内膜炎等多种并发疾病，其中格林巴利综合征（GBS）是最严重的并发症，可致感染者死亡。

空肠弯曲杆菌引起的胃肠现病例数已超过沙门氏菌及李斯特菌，其作为一项感染率极高的致病菌，目前已作为食品安全、畜牧兽医及公共卫生等领域的常规监测指标。

传统的检测与分离方法为生化及血清凝集试验，但培养周期长、检验程序复杂、确诊检验结果需10-20d，且报告结果差异大，该菌生长条件苛刻，食品中该菌数量极少，传统的选择性富集培养，很难从样品中检出，且该菌还存在一种“存在但不可培养”的状态，给传统方法检出带来极大的困难。因此，寻求一种能对食品空肠弯曲杆菌进行快速检测、检测灵敏度度且的方法十分重要。

变性高效液相色谱（DHPLC）通过反相高效液相色谱原理，对核苷酸片段分子进行分离，操作全自动化，准确度和灵敏度高，但对于食品中空肠弯曲杆菌含量极低时，检测结果并不十分准确。本发明提供一种检测灵敏度高、准确性高的猪肉中空肠弯曲杆菌的检测试剂盒及检测方法。

发明内容

针对上述现有技术的缺陷，本发明提供一种检测灵敏度高、准确性高的猪肉中空肠弯曲杆菌的检测试剂盒及检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种猪肉中空肠弯曲杆菌的检测试剂盒，所述的检测试剂盒包括培养基和检测液；所述的培养基为肉汤；所述的检测液由以下含量的组分制成:

10PCR Buffer 缓冲液                3~5μl，

Taq DNA 聚合酶                  0.2~0.4μl， 

dNTP                               3~5μl，  

100bp DNA Ladder Marker          0.1~0.6μl，

PCR引物                           1~ 2μl,

Tris.Cl                             5~10mg，

氯化钠                            1~2.2mg，

氯化镁                            1~2.2mg，

十二水磷酸氢二钠                 0.2~0.5mg，

增菌液                             3~5 mg。

优选的，所述的肉汤为Bolton肉汤，肉汤中含有0.3%~0.5%重量份的生长促进剂。

优选的，所述的生长促进剂为焦亚硫酸钠、丙酮酸钠与硫酸亚铁按2:1:5的重量份混合的混合物。

优选的，所述的PCR引物为：C16S-F：5’-CTG CTT AAC ACA AGT TGA GTA GG-3’(183～205)，C16S-R：5’-TTC CTT AGG TAC CGT CAG AA-3’(449～468)。

优选的，所述的Taq DNA 聚合酶浓度为2-5U/μl。

优选的，所述的dNTP浓度为5-10mmol/L，所述的PCR引物浓度为10-25μmol/L。

一种采用上述检测试剂盒检测猪肉中空肠弯曲杆菌的方法，包括以下步骤：

（1）量取10PCR Buffer 缓冲液3~5μl，Taq DNA 聚合酶0.2~0.4μl，dNTP3~5μl，100bp DNA Ladder Marker 0.1~0.6μl，PCR引物 1~ 2μl,Tris.Cl 5~10mg，氯化钠1~2.2mg，氯化镁1~2.2mg，十二水磷酸氢二钠0.2~0.5mg，增菌液3~5 mg，配置成检测液；

在Bolton肉汤中加入0.3%~0.5%重量份的生长促进剂制得培养基；

（2）取待测猪肉样品2~5g，研碎，接种于培养基中，于微需氧条件下培养；