[发明专利]一种聚磷菌（B8）的多聚磷酸盐染色培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种聚磷菌(B8)的多聚磷酸盐染色培育方法，属于污水处理技术领域。 

背景技术

地表水环境污染问题之一是水体富营养化，藻类大量繁殖引发淡水区域“水华”和海域的“赤潮”现象。生态学中的“利比希(Liebig)最小因子定律”表明，水体中较高浓度的磷含量是引发地表水体富营养化的主要环境因素，当总磷浓度超过0.1mg/L(如果磷是限制因素)时，藻类会过量生长，引发江河、湖塘、近海的富营养化。 

国内外的污水污水处理厂多采用生物法即生物强化除磷工艺，而聚磷菌是生物强化除磷工艺的主要功能菌群。聚磷菌的传统筛选步骤为：先使用培养基平板对样品中的菌种进行初筛，分离纯化后筛得的菌株做效果验证处理，最终复筛得到具有除磷功能的菌种。这种从外部模拟废水处理条件出发，以达到聚磷菌除磷优化为目的，而寻求菌株在生长过程中摄取最大磷量时的外部培育条件。由此筛得的菌株投入实际废水中通常不表现除磷功能甚至自溶死亡，因而难以应用于实际污水处理工程之中。 

对于聚磷菌培育方法的开发，中国发明专利(申请公告号CN 201110199597.3)公开了一种在活性污泥中快速筛选聚磷菌的方法，其中使用了甲苯胺蓝对菌株体内多聚磷酸盐颗粒染色再用显微镜观察。《Bioresource Technology》2011年第102卷第17期8057-8062页报道了Vasvi Chaudhry公开一种高通量快速筛选聚磷菌的方法，在其方法中就利用甲苯胺蓝对菌株中的多聚磷酸盐颗粒染色来快速鉴定聚磷菌。因此，本发明从安徽省天长市污水处理厂具有较高除磷效率(70％-80％)活性污泥中获取的聚磷菌B8进行优化培养，对聚磷菌的多聚磷酸盐染色培育条件做了初步探究，以期为聚磷菌菌剂制备与发酵法批量化生产提供技术参考。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种除磷功能菌多聚磷酸盐染色培育方法。 

所述除磷功能菌多聚磷酸盐染色培育方法为将B8菌株接种于50mL的CCZU培养液中，放置于振荡培养箱中进行培养，得到供试菌液。再向菌液中投加2％的多聚磷酸盐(Poly-P)染色液置于30℃下静置染色24h，按同样的操作制作空白样。对种子液和空白样经8000r/min离心15min，对上清液分别在625nm处测定其吸光度，对测得数据处理后得到多聚磷酸盐染色液(CCZU-TBO)染色率，以CCZU-TBO染色率来表征多聚磷酸盐颗粒在种子液中的含量。CCZU-TBO染色率计算公式如下： 

CCZU-TBO染色率＝{(A₀-A)/A₀}×100％ 

式中：A₀为未接菌菌液在CCZU-TBO于625nm处的吸光度；A为接菌后菌液在CCZU-TBO于625nm处的吸光度。 

所述CCZU培养液组成为，在1L的蒸馏水中含有：(NH₄)₂SO₄2.5g；Na₂HPO₄30.6g；KH₂PO₄3g；MgSO₄·7H₂O 0.25g；CaCl₂0.25g；柠檬酸钠4.0g；NaCl 2.5g；蔗糖0.01g。此溶液使用前需要进行灭菌。 

所述多聚磷酸盐(Poly-P)染色液CCZU-TBO组成为，在1L的蒸馏水中含有：(NH₄) ₂SO₄2.5g，Na₂HPO₄30.6g，KH₂PO₄3g，MgSO₄·7H₂O 0.25g，CaCl₂0.25g，柠檬酸钠4.0g，NaCl 2.5g，蔗糖0.01g，甲苯胺蓝0.025g，加水至1L。此溶液使用前需要进行灭菌。 

所述CCZU培养基的制备方法为：将(NH₄)₂SO₄、Na₂HPO₄、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、CaCl₂、柠檬酸钠、NaCl、蔗糖、琼脂粉加入蒸馏水中定容至1L，灭菌后即得聚磷菌的培养基。