[发明专利]一种检测阿司匹林和氯吡咯雷药物双重抵抗的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，具体涉及一种检测阿司匹林和氯吡咯雷药物双重抵抗的试剂盒。

背景技术

阿司匹林和氯吡咯雷的联合应用，对冠心病患者，尤其是接受了皮冠脉介入术(PCI)的冠脉综合症患者，能显著防止心血管不良事件的发生，降低死亡率，因此无论是在欧美，还是国内的冠心病治疗指南中，阿司匹林和氯吡咯雷都具有举足轻重的地位。但是，随着阿司匹林和氯吡咯雷等药物使用的推广和深入，阿司匹林抵抗者常伴有氯吡咯雷抵抗，因此这类患者在经PCI术后发生血栓栓赛事件的危险增加。部分接受高危PCI患者在给予阿司匹林和氯吡咯雷双重抗血小板治疗时却具有双重抵抗，这类患者是发生血栓栓赛事件的高危人群，因而这类患者急需预先检测是否具有阿司匹林和氯吡咯雷抵抗，从而为临床规划用药作为参考，预防不良事件发生。但是目前关于阿司匹林和氯吡咯雷双重抵抗的研究还非常有限，缺乏PCI术后冠心病患者的阿司匹林和氯吡咯雷双重抵抗检测手段，也缺乏大规模随机临床研究评估抗血小板药物抵抗冠心病患者对其抗血小板药物抵抗检测方法和试剂的准确性和特异性，结果导致检测方法效果误差大，特异性低从而使得血小板抵抗功能检测很难进入临床广泛应用。

发明内容

为解决以上现有技术问题，本发明的目的是提供一种适用于检测PCI术后患者阿司匹林和氯吡咯雷药物双重抵抗的试剂盒。检测样本为血清，可以长期保存，检测过程简单、快速；通过大规模样本收集和多种手段验证试剂检测结果，其检测准确度和特异性都有很大幅度提高。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

一种检测阿司匹林和氯吡咯雷药物双重抵抗的试剂盒，包括：

(1)CK-MB抗体包被的酶联板；

(2)酶标记CK-MB特异性抗体：采用辣根过氧化物酶标记；

(3)CK-MB标准溶液：

(4)底物显色液：四甲基联苯胺；

(5)终止液：盐酸缓冲液；

(6)浓缩洗涤液：去离子水；

(7)浓缩复溶液：0.1％-5％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液。

所述的终止液优选为3％的盐酸缓冲液；

所述的浓缩复溶液优选为1％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液；

所述的CK-MB抗体为单克隆抗体，该单克隆抗体的制备方法包括：

(1)采用6～8周龄Balb/c小鼠作为免疫动物，CK-MB纯化蛋白免疫原免疫剂量为50～80μg/只，首次免疫时将免疫原于等量的弗氏佐剂混合乳化，颈背部皮下多点注射，间隔2～3周取相同剂量免疫原加等量弗氏不完全佐剂混合乳化，加强免疫一次。免疫完成7天后取脾细胞；

(2)细胞融合与克隆：将脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞按照5：1混合，采用HAT培养基筛选杂交瘤细胞，然后将阳性细胞扩大培养，产生分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片；

(3)抗体在37℃下做冻干处理，放入-20℃冷藏；

所述的CK-MB抗体包被的酶联板的制作方法包括：

(1)用包被缓冲液将CK-MB抗体稀释为0.01～0.05μg/ml浓度的抗体稀释液；

(2)向酶联板中加入抗体稀释液，孵育，倾去包被液，用洗涤液洗涤，拍干；

(3)向酶联板的每孔中加入封闭液，孵育，倾去孔内液体，干燥后用铝膜真空密封保存；

所述包被缓冲液为pH8.5-10的碳酸盐缓冲液，优选为pH9碳酸盐缓冲液；所述洗涤液为含有2-6％的吐温-20的去离子水，优选为5％的吐温-20的去离子水；所述封闭液为含有5％-15％的脱脂奶和0.1％-2.5％的人血清白蛋白溶液，优选为10％的脱脂奶和1％的人血清白蛋白溶液。

本发明与现有技术相比，其详细说明如下：

本发明针对的检测对象为PCI术后合用阿司匹林和氯吡格雷的患者血清样品，一般PCI术后病人在服药1个礼拜后检测。