[发明专利]EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种抗体检测试剂。

本发明还涉及包含该检测试剂的试剂盒及制备方法。

背景技术

EB病毒(epstein-barr virus,EBv)，又称人类疱疹病毒4型(Human herpesvirus 4(HHV-4))。Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，认为该病毒是多种恶性肿瘤(如鼻咽癌)的病因之一，它主要感染人类口咽部的上皮细胞和B淋巴细胞。在中国南方鼻咽癌患病人群中大多都检测到有EB病毒基因组存在。EB病毒分布广泛，多呈散发性，亦可引起流行。EB病毒与鼻咽癌关系十分密切,鼻咽癌病人血清中EB病毒VCA-IgA抗体水平明显升高。VCA-IgA抗体与鼻咽癌的发生发展和预后均有密切关系。

目前检测EB病毒VCA-IgA的检测试剂主要是采用酶联免疫吸附(ELISA)法、Real-time定量PCR法等，但存在操作复杂、检测灵敏度较低、检测时间长的缺陷。

胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

免疫金标记技术(Immunogold labelling techique)主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。

胶体金法检测试剂将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。

中国专利申请CN101949932A提供了一种胶体金法检测EB病毒IgA抗体的检测试剂，其采用EB病毒NA1抗原包被检测线，鼠抗人IgA单抗标记胶体金，用羊抗鼠IgG抗体包被质控线。中国专利申请CN102539768A提供了一种EB病毒Zta IgA抗体胶体金检测试剂，其采用EB病毒Zta抗原包被检测线，鼠抗人IgA单抗标记胶体金，用羊抗鼠IgG抗体包被质控线。

以上两种胶体金法检测试剂均采用EB病毒抗原包被检测线，检测线的抗原可与检测样本中的EB病毒IgG、IgA、IgM等所有抗体反应，由于IgG是血清中免疫球蛋白主成分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75％，是检测目标IgA抗体的4～7倍，可严重竞争干扰检测目标IgA与包被EB病毒抗原的结合，造成检测结果灵敏度与特异性降低。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，用鼠抗人IgA单克隆抗体划检测线，并引入生物素-亲和素系统，直接捕获检测样本中的全部IgA抗体，可以有效的避免IgG、IgM等抗体的干扰，提高检出的灵敏度与特异性。

本发明的另一个目的在于提供一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂盒。

本发明还提供所述检测试剂的制备方法。

根据本发明的一方面，一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，至少包括

一反应膜，所述反应膜上划有检测线和质控线，所述检测线含有鼠抗人IgA单克隆抗体；所述质控线含有生物素；

一抗原垫，所述抗原垫含有由生物素标记的重组EB病毒VCA抗原；

一金标垫，所述金标垫含有胶体金标记的亲和素复合物。