[发明专利]一种优化金线莲类原球茎玻璃化法超低温保存效果的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物或其局部的保存领域，具体涉及一种优化金线莲类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法。

背景技术

超低温保存是上世纪70年代发展起来的一项现代种质资源离体保存技术。通常在液氮中保存，被保存材料细胞内的物质代谢和生长活动几乎完全停止，处在相对稳定的生物学状态，达到长期保存种质的目的，超低温保存是目前唯一不需要连续继代的中长期保存方式。玻璃化法超低温保存是将细胞或组织置于由一定比例的渗透性和非渗透性保护剂组成的玻璃化溶液中，使材料及其玻璃化溶液在足够快的降温速率下固化成非结晶的玻璃化态，并以这种玻璃态在低温下保存。玻璃化法因操作简单快捷，成本低，适宜保存种类广泛，保存材料遗传性稳定，保存效果好等优点，是近十年来用于优良种质资源中长期保存的首选方法。

金线莲为兰科开唇兰属多年生草本植物，在民间具有广泛药用价值，素有“药王”、“金草”、“神草”、“鸟人参”等美称，因此建立有效保存金线莲种质资源的超低温保存技术至关重要。兰科是被子植物中的第一大科，作为一种重要的观赏植物资源，在园林和观赏园艺的发展过程中占据重要地位。已成功实现超低温保存的兰科植物种类包括金钗石斛、铁皮石斛、大花万代兰、血色石斛、舌唇兰属、矮万代兰等。目前建立的金线莲类原球茎超低温保存体系成活率较低，还不足以满足生产与科研的需求。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种新的优化金线莲类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，以克服现有技术中植物种质资源中长期保存难以实现，以及超低温保存的植物或其组织恢复生长率低的缺点。

为了实现上述目的或者其他目的，本发明是通过以下技术方案实现的。

一种优化金线莲类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，采用玻璃化超低温保存的方法对金线莲类原球茎进行保存，具体步骤如下：

1)预培养：将金线莲类原球茎置于预培养基上，在光照培养箱中预培养1～5天；

2)装载液处理：室温下，将金线莲类原球茎在装载液中浸泡处理40～60分钟后移除装载液；

3)玻璃化溶液处理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理金线莲类原球茎40～60分钟；

4)液氮保存：保持金线莲类原球茎浸泡在玻璃化溶液中的状态，并将其置于的液氮中超低温保存；

所述玻璃化溶液为含有0.1～0.5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。

所述MS培养液含有1900mg/L KNO₃，1650mg/L NH₄NO₃，170mg/L KH₂PO₄，370mg/LMgSO₄·7H₂O，440mg/L CaCl₂·2H₂O，37.3mg/L Na₂-EDTA，27.8mg/L FeSO₄·7H₂O，100mg/L肌醇，0.5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸吡哆醇，0.1mg/L盐酸硫胺素，2mg/L甘氨酸，0.83mg/L KI，6.2mg/L H₃BO₃，22.3mg/L MnSO₄·4H₂O，8.6mg/L ZnSO₄·7H₂O，0.25mg/L Na₂MoO₄·2H₂O，0.025mg/L CuSO₄·5H₂O，0.025mg/L CoCl₂·6H₂O，余量为水。所述MS培养液的pH为5.8。