[发明专利]一种臭矢菜素A的制备方法及抗肿瘤应用

说明书

技术领域

本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用，特别涉及一种臭矢菜素A的制备方法及抗肿瘤应用。

背景技术

臭矢菜素A（Cleomiscosin A）为香豆素类物质，CAS号76948-72-6，mp.250-251℃，分子式C₂₀H₁8O₈，分子量386.36，结构式为

臭矢菜素A来源于白花菜科(Capparidaceae) 臭矢菜 Cleome icosandra Linn.种子。研究表明，臭矢菜素A具有细胞毒活性。对P388的ED50为0.4μg/mL或2.8μg/mL，对KB细胞的ED50为4.9μg/mL。臭矢菜素A还具有肝保护活性。在大鼠肝细胞培养中，在本品0.1mg/mL浓度时，对由D－半乳糖胺所致的肝中毒使谷丙转氨酶(GPT)从对照组的100%降至68%(P<0.001)。

通过文献检索， 国内尚未见臭矢菜素A用于制备抗肿瘤药物。

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种臭矢菜素A的制备方法及抗肿瘤应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

臭矢菜素A的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）以臭矢菜种子为原料，切成段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持3-5min后，过40目筛备用；

（2）原料按照料液比1:4-6（g/ml）的比例加入乙醇水溶液后，再加入0.3-0.5%的纤维素酶，在超声功率500-700W、45-60℃条件下酶解60-90min，得到酶解原料；

（3）将酶解原料投入加入闪式提取器中，加入提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得到粗提物；

（4）将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿-甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集臭矢菜素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；

（5）将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到臭矢菜素A结晶。

所述步骤（2）中乙醇水溶液体积百分比为70-80%。

所述步骤（2）中提取溶剂为70-85%的乙醇溶液。

所述步骤（3）中闪式提取电压为150V，提取时间为3-5min。

所述步骤（4）中高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10。

所述步骤（4）中氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。

所述制备的臭矢菜素A，在其口服配方中添加肠吸收促进剂，包含中链脂肪酸盐、胆酸盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。

采用本法制备臭矢菜素A，工艺简便易操作，制备量大，产品得率高，而且低污染；添加肠吸收促进剂，有利于提高生物利用度。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

臭矢菜素A的制备

以臭矢菜种子为原料，切成1cm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后，过40目筛备用，称取1kg，按照料液比1:4（g/ml）的比例加入80%乙醇水溶液后，再加入0.5%的纤维素酶，在超声功率700W、50℃条件下酶解70min，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入6L80%的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为3min，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPa，柱内径为250mm，层析柱径高比为1：10，氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:6、1:13梯度洗脱，收集臭矢菜素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到臭矢菜素A结晶，含量为95.8%。

 

实施例2：

臭矢菜素A的制备