[发明专利]一种鹿皮胶原蛋白的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种利用高压脉冲电场技术从鹿皮中提取胶原蛋白的方法。

背景技术

胶原(collagen)是一种由动物细胞合成的生物高分子，广泛存在于有机体中的结构蛋白质，约占哺乳动物总蛋白的1/3，是皮肤、软骨、动脉血管壁及结缔组织的主要成分，在动物体内起支持、保护、连接等多种作用。胶原蛋白具有良好的生物相容性和弱抗原性，在保健品、药品辅料以及生物材料等领域应用十分广泛，常规胶原蛋白提取方法包括酸法、碱法、热降解法、酶法以及这些方法结合使用等，在提取过程中存在工艺周期长，工艺步骤复杂，提取率较低等问题，Gomez-Guillen等研究了高压处理对胶原蛋白提取过程的影响，此外，超声、压力脉冲等预处理方法也被尝试用于胶原蛋白提取。孟黄军等人以胶原蛋白的热稳定性为基础，考察了基于多级逆流固液萃取技术的鱼鳞胶原蛋白提取工艺，探讨了酶促反应和膜分离耦合技术用于制备胶原蛋白多肽的可行性。王建辉等人采用酸法和酶法从东北特产梅花鹿鹿皮中提取胶原蛋白，对其中的水分、灰分、氮含量、微量元素及羟脯氨酸含量、分子量、氨基酸及饱湿性和吸水性进行测定，并与牛皮和猪皮的胶原进行比较。

发明内容

本发明的目的是提供一种从梅花鹿皮或马鹿皮中提取胶原蛋白方法，采用该方法提取梅花鹿皮或马鹿皮中胶原蛋白具有提取周期短、提取率高等优点。

本发明的技术方案如下：

①鹿皮前处理：取新鲜梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗净，切成1.0cm×1.0cm的小块，用蒸馏水洗至无血色；②脱脂：胶体磨或高速组织捣碎机捣碎鹿皮，采用超临界CO2萃取装置萃取1～5小时，萃取后鹿皮即为脱脂鹿皮；③去除杂蛋白：脱脂鹿皮中加入5倍～20倍(W/V)的1％～5％NaCl溶液混匀，用液体泵将料液连续泵入高电压脉冲提取装置中，以温度20～50℃，场强10～30KV，脉冲数5～10为参数提取，连续收集提取液，离心，弃上清，得到去除杂蛋白的沉淀；沉淀用10倍～30倍(W/V)的蒸馏水冲洗，离心，弃上清，得除盐后的沉淀：④胶原蛋白的提取：取上述步骤获得的沉淀，按10倍～30倍(W/V)量加入pH1～7的有机酸溶液，加入鹿皮重量1.0％～5.0％(W/W)的蛋白酶，用液体泵将料液连续泵入高压电脉冲提取装置中，以温度20～50℃，场强10～30KV，脉冲数5～10为参数提取，连续收集提取液，离心，上清液40℃浓缩至-定体积，冷冻干燥，得白色固体的本发明产品，本发明具有的优点在于鹿皮胶原蛋白的提取方法较已有工艺快速、高效、提取率高，适合工业放大生产等优点。

具体实施例：

实施例1

①鹿皮前处理：取新鲜梅花鹿皮去毛、刮去油脂、洗净，切成1.0cm×1.0cm的小块，用4℃蒸馏水洗至无血色，沥干，取1.0kg鹿皮备用；②脱脂：取鹿皮，高速组织捣碎机捣碎，置超临界CO2萃取釜中25MPa 40℃萃取1小时，取萃取后鹿茸0.85kg备用；③去除杂蛋白：取脱脂鹿皮085kg加入4.25L 5％NaCl溶液混匀，用液体泵将料液连续泵入高电压脉冲提取装置中，以温度50℃，场强30KV，脉冲数10，供料速度，5ml/min为参数提取，连续收集提取液，离心，弃上清得到去除杂蛋白的沉淀：沉淀用25.5L蒸馏水冲洗，离心，弃水层，得除盐后的沉淀0.70kg。④胶原蛋白的提取：取上述步骤获得的沉淀0.70kg，加入pH2的柠檬酸溶液21L，加入14g胃蛋白酶，用液体泵将料液连续泵入高压电脉冲提取装置中，以温度37℃，场强30KV，脉冲数10，供料速度5ml/min为参数提取，连续收集提取液，离心，上清液用旋转蒸发仪在40℃下浓缩至1.4L，-55℃冷冻干燥，得鹿皮胶原蛋白390g。

实施例2