[发明专利]一种检测脏器组织中是否存在纳米颗粒的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测纳米颗粒的方法。

背景技术

随着纳米技术的发展，纳米材料被应用在了与人类息息相关的各个领域，例如制药、食品添加剂、造纸、污水处理等等，然而，大量研究表明，长时间的食用或接触这些纳米材料会对人体造成影响，因此，纳米毒理已成为了当今的一个重点课题。目前，对于纳米材料直接对机体产生危害的机制的主要观点为，当纳米材料以颗粒的形式进入脏器后，其纳米级体积和比表面积会引起脏器细胞内活性氧的大量积累，造成活性氧代谢紊乱，最终导致氧化应激，而氧化应激是细胞的重要威胁，会造成细胞的DNA损伤，功能失调，甚至细胞凋亡。因此，在纳米毒理领域的研究中，为判断生物机体产生的损伤是否为纳米材料引起，必须确定纳米材料是否以颗粒形式沉积于脏器组织内部。在以往的研究中，检测纳米材料是否进入脏器可以采用两种方法，一种是采用电感耦合等离子体(ICP)检测硝酸消化后的脏器组织中元素含量，这种方法可以直接分析消化后的脏器组织中是否含有纳米材料所含元素，含量为多少，从而确定目的纳米材料是否进入脏器，但是这种方法不能确定是否以纳米颗粒形式。另一种方法是利用透射电子显微镜直接观察组织切片，这种方法可以直接原位观察纳米颗粒在脏器中的分布，但是这种方法需要对脏器组织进行固定、包埋、切片，制备过程非常繁琐，对专业技术要求高，切片设备非常昂贵，并且，在纳米颗粒含量少的情况下，每片组织切片中含有的纳米颗粒含量非常有限，寻找起来非常困难，另外，通过形态观察的方法无法判断寻找到的颗粒物成分，因此并不能确定该颗粒即为目的纳米颗粒。如何有效地检测组织中目标纳米颗粒的积累是纳米毒理领域的重点。

发明内容

本发明是要解决现有的检测脏器组织中纳米颗粒的方法繁琐、成本高的问题，提供一种检测脏器组织中是否存在纳米颗粒的方法。

本发明检测脏器组织中是否存在纳米颗粒的方法，按以下步骤进行：

一、将脏器组织用PBS缓冲液洗净，取0.3～0.5g置于离心管，再加入500μL RIPA裂解液，破碎；

二、再向离心管中加入500μL RIPA裂解液，震荡混匀，得组织液，利用过滤网过滤 组织液，得滤液；

三、取滤液置于新的离心管中，用饱和酚抽提1-3次，弃掉酚层，得液体A；

四、将液体A于14000g离心30分钟，弃上清，得沉淀；

五、将沉淀用100～200μL酒精悬浮，滴加到铝板或铜板表面，待酒精挥发后进行扫描电子显微镜检测；

六、通过扫描电子显微镜观察到纳米颗粒后对纳米颗粒进行能谱分析，以验证是否为要检测的纳米颗粒。

本发明具有以下有益效果：

本发明采用扫描电子显微镜加能谱分析检测的方法，直接将脏器组织处理为组织匀浆，省去了固定、包埋、切片的过程，样本制备方法相对透射电子显微镜所需的组织切片技术更为简便，容易操作，不需要昂贵的切片设备。另外，本发明将组织样本全部滴到铝板或铜板表面进行检测，纳米颗粒含量相对组织切片要多，方便寻找，降低了检测的难度。

本发明加入了能谱检测，在通过扫描电子显微镜观察到类似的目标颗粒后，可以通过对颗粒进行能谱检测，分析颗粒中的元素含量来确认所观察到的颗粒是否为目标纳米颗粒。

附图说明