[发明专利]一种TAT-PAP融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种TAT-PAP融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白是由人类Ⅰ型免疫缺陷病毒HIV-Ⅰ的转录反式激活因子TAT的蛋白转导域PTD和前列腺酸性磷酸酶PAP形成的融合蛋白TAT-PAP。

2.根据权利要求1所述的TAT-PAP融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的TAT-PAP融合蛋白的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1，选取包含蛋白转导域PTD的转录反式激活因子TAT，且其两端分别含有Nco I和Xho I酶切位点序列的pTAT-HA表达载体；pTAT-HA表达载体中PTD的cDNA序列为SEQ ID NO:2所示的序列；

步骤2，从Genebank中获取前列腺酸性磷酸酶PAP的cDNA序列，经原核表达优化PAP基因序列，PAP基因序列为SEQ ID NO:3所示的序列；

步骤3，将步骤2经原核表达优化后的PAP基因序列合成为PAP基因片段，序列两端分别含有Nco I和Xho I酶切位点的序列，并装载到pUC57载体中，即为pUC57-PAP载体；

步骤4，将pTAT-HA表达载体和pUC57-PAP载体均用限制性内切酶Nco I和Xho I进行双酶切，酶切条件为：37℃反应1～16h，65℃灭活20min，分别回收载体pTAT和目的基因片段PAP；

步骤5，用T4连接酶连接酶切后的载体pTAT和目的基因片段PAP，反应条件为：室温，10min，筛选阳性单克隆获得pTAT-PAP重组质粒；

步骤6，将pTAT-PAP重组质粒转化大肠杆菌DE3感受态细胞；

步骤7，诱导融合蛋白表达，即得到TAT-PAP融合蛋白。

4.根据权利要求1或2所述的TAT-PAP融合蛋白在制备治疗糖尿病神经病理性痛药物中的应用。