[发明专利]一种胡黄连悬浮细胞的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及组培条件下胡黄连悬浮细胞的培养，属于生物技术领域。

 

背景技术

胡黄连，Picrorhiza scrophulariiflora Pennell.，玄参科，又名割孤露泽、胡连、多年生草本，有毛，生于海拔3600-4400m的高寒地区的岩石上及石堆中、浅土层的向阳处或生于高山草地，产于印度、印度尼西亚，国内主产于西藏，主治：阴虚骨蒸；潮热盗汗；小儿疳疾；湿热泻痢；黄疸；吐血；衄血；目赤肿 痛；痈肿疮疡；痔疮肿毒，生物学特性喜凉爽湿润、土质肥沃，适合在高海拔地段栽培。目前主要的栽培技术为种子繁殖，选成熟的种子，在秋末播种，事前做苗床，床面高出地面20cm，随当地的地形做成长方形，四周设排水汉，播种后覆土，盖草保湿防寒，翌年春天出苗。利用细胞培养技术可以获得大量的胡黄连悬浮细胞，且不受季节、地域的限制。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供胡黄连悬浮细胞培养的快速繁殖方法，工艺流程简单，不受地域，季节等自然环境因素影响等优点，有利于建立胡黄连悬浮细胞的大规模工厂化生产。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

选用胡黄连幼嫩的叶片，用去污皂刷洗8分钟，自来水冲洗20分钟，在超净工作台上用3％的次氯酸钠消毒9分钟，无菌水冲洗5次，接种在B₅+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2,4-D3.0mg/L+DTT10mmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为光照强度1000lx，光照7h/d，温度22℃，湿度40%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基B₅+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4-D3.0mg/L培养基中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养培养40天后接入B₅+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4-D3.0mg/L+CuCl₂5-15μmol/L+水解酪蛋白80-100mg/L的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度3000lx，光照15h/d，温度25℃，湿度60%，15天继代一次，洗涤，60℃烘干至恒重称量，得干重。

采用本发明制备的胡黄连悬浮细胞，产量大，能耗少，生长周期短，次生代谢物产量高。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

选用胡黄连幼嫩的叶片，用去污皂刷洗8分钟，自来水冲洗20分钟，在超净工作台上用3％的次氯酸钠消毒9分钟，无菌水冲洗5次，接种在B₅+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+2,4-D3.0mg/L+DTT10mmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为光照强度1000lx，光照7h/d，温度22℃，湿度40%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基B₅+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4-D3.0mg/L培养基中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养培养40天后接入B₅+6-BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+2,4-D3.0mg/L+CuCl₂5μmol/L+水解酪蛋白80mg/L的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度3000lx，光照15h/d，温度25℃，湿度60%，15天继代一次，洗涤，60℃烘干至恒重称量，得干重，悬浮细胞增长率69%。

实施例2