[发明专利]一种苦石莲悬浮细胞培养的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及苦石莲悬浮细胞培养的快繁方法，属于生物技术领域。

背景技术

苦石莲，Caesalpinia minax Hance，又称为石莲子、老鸦枕头、土石莲子，豆科，有刺藤本，全株被短柔毛。2回双数羽状复叶，羽片5～8对，托叶锥状；小叶12～24枚，近无柄，矩形或倒卵形，长约1.6～3.5厘米，阔0.8～1.2厘米，先端急尖成细尖，基部圆形，全缘。分布广东、广西、四川、云南等地。药材主产云南、广西。此外，广东、四川、江西、福建等地亦产，生于山沟中空旷的溪旁、路边或灌木丛中。主产云南、广西。此外，广东、四川、江西、福建等地亦产，该植物的根、苗亦供药用性苦寒，有散瘀，止痛，清热，去湿的功效，目前主要是野外采集。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供石莲悬浮细胞增殖系数高，生长周期短，次生代谢物含量高，为苦石莲药用成分的开发和利用提供新的途径。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

取苦石莲幼嫩叶片，在肥皂水中浸泡5min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化汞处理10min，无菌水冲洗7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接入ER+NAA0.05mg/L+6-BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2,4-D1.0mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7g/L琼脂，30g/L葡萄糖，1000lx，温度23℃，湿度50%，诱导出来的愈伤组织，接入ER+NAA2.0mg/L+6-BA3.0mg/L +2,4-D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巯基乙醇3-5ml/L培养基中进行愈伤组织增殖，附加7g/L琼脂，30g/L葡萄糖，2000lx，温度23℃，湿度50%，取生长良好，长势均一的愈伤组织，称取0.3g加入ER+2,4-D3.0mg/L+KT0.1mg/L+对氨基苯甲酸80-100mg/L+0.35%琼脂+20g/L葡萄糖培养基中水平震荡培养，震荡速度90r/min，每60ml细胞悬浮液装入150ml三角瓶中培养，温度26℃，光照2000lx，培养一定时间后，取出样品，用滤纸吸干细胞表面水分。

采用本发明制备的苦石莲悬浮细胞长势好，生长周期短，次生代谢物含量高。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取苦石莲幼嫩叶片，在肥皂水中浸泡5min，流水冲洗25min，超净工作台上0.1%氯化汞处理10min，无菌水冲洗7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接入ER+NAA0.05mg/L+6-BA5.0mg/L+IBA0.25mg/L+2,4-D1.0mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加7g/L琼脂，30g/L葡萄糖，1000lx，温度23℃，湿度50%，诱导出来的愈伤组织，接入ER+NAA2.0mg/L+6-BA3.0mg/L +2,4-D3.0mg/L+NAA2.0mg/L+巯基乙醇4ml/L培养基中进行愈伤组织增殖，附加7g/L琼脂，30g/L葡萄糖，2000lx，温度23℃，湿度50%，取生长良好，长势均一的愈伤组织，称取0.3g加入ER+2,4-D3.0mg/L+KT0.1mg/L+对氨基苯甲酸90mg/L+0.35%琼脂+20g/L葡萄糖培养基中水平震荡培养，震荡速度90r/min，每60ml细胞悬浮液装入150ml三角瓶中培养，温度26℃，光照2000lx，培养一定时间后，取出样品，用滤纸吸干细胞表面水分，增长率47%。

实施例2