[发明专利]一种亮叶冬青的组培快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种亮叶冬青的组培快速繁殖方法，属于生物技术领域。

背景技术

亮叶冬青，Ilex nitidissima C. J. Tseng，冬青科，常绿小乔木，产于中国江西东北部、湖南南部和广西东北部及南部，高可达6米；叶片革质，背面具腺点或无，先端尾状渐尖；花序簇生，雄花序的每个分枝具3花，雌花序的每个分枝具1花，稀具2～5花；花4基数，稀5或6基数；败育子房球形或垫状，具短喙；果球形，直径约5毫米，成熟时，红色，具隆起的条纹，内果皮革质。果期7～10月。生于海拔960～1250米的山坡密林、疏林或杂木林中。为冬青科植物亮叶冬青的根叶。树皮含树脂。功效：凉血解毒、通络止痛。主治：治热毒疮肿、痢疾、跌扑闪挫、瘀血作痛、风湿热痹。性味归经：苦、微辛，凉，入心、肝二经，目前主要采用常规栽植，组培方法可以快速获得大量的亮叶冬青幼苗，保持遗传性状的稳定性，克服地域的局限性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种亮叶冬青的组培快速繁殖方法，由该方法所制备得到的亮叶冬青达到了增殖系数好，成活率高的要求，可以为其产业化生产提供一种周期短的人工培育方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：

取亮叶冬青顶芽，剪去多余叶片，保留一小叶，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分钟，流水冲洗0.5小时，使用10%安替福民溶液处理6min，无菌水冲洗5-7遍，切去切口，获得的无菌芽接种入B₅+NAA0.1mg/L+KT0.5mg/L+2，4-D0.1mg/L+300μg/g苄氨进行丛生芽诱导，培养条件采用800lx弱光强下培养，蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH值5.8，温度25℃，光期8h，暗期16h，诱导出来的亮叶冬青丛生芽转接于B₅+6-BA1.5mg/L+IBA0.1mg/L进行丛生芽增殖培养，培养条件为光照2000lx，蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH值5.8，温度27℃，光期12h，暗期12h，增殖的丛生芽处理后接入含1/2 B₅+IBA0.05mg/L+AC1.0g/L的培养基中进行生根诱导，培养条件光照6000lx，光期16h，暗期8h，长约5cm的试管苗取出栽植于伯爵泥岩525^#：蛭石=3：2的基质中，三周后喷施叶面肥，湿度85%，温度25℃，遮盖两层薄膜，透光率保持在35%左右。

采用本发明制备的亮叶冬青组培幼苗生产周期短、繁殖率高，生根率92%。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取亮叶冬青顶芽，剪去多余叶片，保留一小叶，用毛刷去除污垢，加入漂白粉浸泡3分钟，流水冲洗0.5小时，使用10%安替福民溶液处理6min，无菌水冲洗5-7遍，切去切口，获得的无菌芽接种入B₅+NAA0.1mg/L+KT0.5mg/L+2，4-D0.1mg/L+300μg/g苄氨进行丛生芽诱导，培养条件采用800lx弱光强下培养，蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH值5.8，温度25℃，光期8h，暗期16h，诱导出来的亮叶冬青丛生芽转接于B₅+6-BA1.0mg/L+IBA0.05mg/L进行丛生芽增殖培养，培养条件为光照2000lx，蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH值5.8，温度27℃，光期12h，暗期12h，增殖的丛生芽处理后接入含1/2 B₅+IBA0.05mg/L+AC0.5g/L的培养基中进行生根诱导，培养条件光照6000lx，光期16h，暗期8h，长约5cm的试管苗取出栽植于伯爵泥岩525^#：蛭石=3：2的基质中，三周后喷施叶面肥，湿度85%，温度25℃，遮盖两层薄膜，透光率保持在35%左右，生根率为86%。

实施例2