[发明专利]青虾卵黄蛋白原Vg基因、编码蛋白及应用

说明书

技术领域

本发明公开一种青虾卵黄蛋白原Vg基因、编码蛋白及应用，涉及生物技术和发育调控领域，具体涉及青虾卵黄蛋白原基因的克隆，还涉及利用该基因dsRNA来调控青虾卵巢的发育速度。

背景技术

青虾，学名日本沼虾(Macrobrachium nipponense)，俗称河虾，隶属十足目（Decapoda）、长臂虾科（Palaemonidae）、沼虾属（Macrobrachium），广泛分布于我国各地水域，生长快、适应性强、养殖经济效益高，是我国重要的淡水养殖虾类。据2012年《中国渔业年鉴》记载，全国养殖青虾年产量超过23万吨，年产值超过150亿元，是目前淡水养殖业中最有发展前途的品种之一。近年来,随着其自然资源的锐减和养殖规模的扩大,养殖的青虾出现了生产性能下降和种质资源退化的情况,其中虾个体小型化和“性早熟”的现象尤为突出。“性早熟”即雌、雄性个体性腺提前发育，在生产中小虾性腺过早成熟，产卵导致个体变小、池塘养殖密度过大、生长规格不齐、近亲交配等一系列问题，最终商品虾的规格降低,繁殖性能下降,严重影响了青虾的品质和产值，成为青虾养殖业发展的一大瓶颈。为实现青虾产业的可持续发展，寻找解决雌性青虾“性早熟”的解决方法变得刻不容缓。

卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)是一种普遍存在于卵生非哺乳动物血液中的蛋白,是几乎所有卵生动物中卵黄蛋白(vitellin,Vn)的前体。卵黄蛋白是所有卵生的脊椎动物和无脊椎动物雌性卵黄的主要成分，在卵黄发生期迅速积累。它被认为是由卵巢外组织合成，分泌释放到血液中，通过血液运输到卵母细胞，以卵黄蛋白的形式积累和储存，是胚胎和幼体早期发育主要的营养来源。卵黄蛋白和卵黄蛋白原含有许多脂肪成分,可为正在发育的胚胎提供氨基酸、脂肪、碳水化合物、维生素、磷和硫等营养和功能性物质。

RNAi（RNA interference, RNAi）是一种广泛存在于真核生物中的高效的序列特异性基因剔除技术。RNAi是由不同来源和长度的双链 RNA（double-stranded RNA, dsRNA）前体所诱发的，可以有效地抑制靶基因RNA 的翻译。近年开始在甲壳动物基因功能研究中使用。目前，甲壳类关于Vg基因的沉默表达尚未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种青虾卵黄蛋白原Vg基因、编码蛋白及应用，该基因用于调控雌性青虾卵巢发育速度，为解决青虾性早熟提供理论基础。

技术方案：

一种青虾卵黄蛋白原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

编码上述青虾卵黄蛋白原的青虾卵黄蛋白原Vg基因。

所述的青虾卵黄蛋白原Vg基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1中的第35位～第7645位所示。

所述的青虾卵黄蛋白原Vg基因所合成的dsRNA。

所述的青虾卵黄蛋白原Vg基因在延缓雌性青虾卵巢发育中的应用。

所述的应用，包括如下步骤：对青虾DNA样本中的青虾卵黄蛋白原Vg基因进行PCR扩增，将扩增产物进行体外转录合成dsRNA，再将dsRNA以注射到青虾的围心腔内。

所述的应用，PCR扩增中使用的上下游引物的序列如SEQ ID NO.3～4所示。

所述的应用，注射步骤中的注射剂量是4μg/g。

有益效果

本发明提供的青虾卵黄蛋白原Vg基因可以制备得到dsRNA，通过注射的方式注入青虾围心腔内，可以有效地延缓青虾卵巢成熟的时间，证明该基因的表达对雌性卵巢发育有非常重要的影响。

附图说明

图1是外源性注射Vg-dsRNA对雌性青虾卵巢GSI性腺发育指数影响的示意图。

注： 1d，3d, 5d, 7d, 9d, 11d, 13d, 15d，17d分别为注射后1，3，5，7，9，13，15和17天(样本量N≥ 3)。

图2是外源性注射Vg-dsRNA对雌性青虾内源Vg基因的表达量影响的示意图。

注： 1d, 3d, 5d, 7d, 9d,11d, 13d, 15d，17d分别为注射后1，3，5，7，9，13，15和17天(样本量N≥ 3)。对照组注射相同剂量的DEPC水。

图3是在肝脏中外源性注射Vg-dsRNA对雌性青虾内源Vg基因的表达量的影响的示意图。

注： 1d，3d, 5d, 7d, 9d, 11d, 13d, 15d，17d分别为注射后1，3，5，7，9，13，15和17天(样本量N≥3)。对照组注射相同剂量的DEPC水。

具体实施方式