[发明专利]一种治疗高胆固醇血症的融合蛋白制备及其用途

说明书

本发明公开一种结合PCSK9的融合蛋白，其融合蛋白由以下通式表示：X‑连接肽‑Y‑连接肽‑Z‑连接肽‑IgG Fc片段；其中，X，Y，Z为LDL‑R(低密度脂蛋白受体)中EGF(A)区多肽突变体，连接肽为(GGGGS)n。本发明所提供的融合蛋白能高亲和结合PCSK9，抑制PCSK9对肝细胞LDL‑R的降解，增加肝细胞对LDL‑C的摄取，使其在治疗高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症等疾病方面具有明显的优势和良好的前景。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种新型融合蛋白的制备及其用途。

背景技术

高胆固醇血症以脂蛋白代谢紊乱或血脂紊乱，尤以血液胆固醇低密度脂蛋白(LDL)升高为特征,可致卒中、冠心病、下肢血管病以及动脉粥样硬化等疾病。目前，治疗药物主要为他汀类药物，该类药物可明显降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，LDL-C水平与冠心病的风险密切相关。因此，降低LDL-C是目前降脂治疗指南中的首选目标。但是，高胆固醇血症的治疗现状不容乐观，大部分高危和极高危患者均未达到LDL-C目标值，即便使用最好的他汀类药物或增加药物剂量也不能使其达标。究其原因，临床长期使用他汀类药物治疗可刺激一种丝氨酸蛋白酶─前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)的表达，PCSK9为低密度脂蛋白受体(LDL-R)的负调节剂，在与肝细胞表面的LDL-R结合后可加速其降解，导致肝细胞以及LDL-R对胆固醇的摄取下降，进而增加循环的LDL-C水平，最终影响患者的治疗效果。由此，PCSK9也成为治疗高胆固醇血症的重要靶点。

针对PCSK9，国外已发展多个治疗性单克隆抗体，且均在临床试验中显示良好的疗效，如赛诺菲与Regeneron联手开发的alirocumab，安进公司同类产品evolocumab，均显著降低健康受试者、家族性高脂血症患者和非家族性高胆固醇血症患者的LDL-C水平；对于他汀类药物效果不佳的患者，在注射单克隆抗体后其血液LDL-C水平也降低40％-72％。

单抗良好的治疗效果鼓舞人们思考并发展更多针对PCSK9的新药，如研究发现，重组可溶性LDL-R的EGF-A区可以阻断PCSK9与LDL-R的结合及相互作用，并达到降低胆固醇的目的；专利(申请号：20128003049.9)公开了一种结合PCSK9的多肽及其使用方法，包括表皮生长因子结构域(EGF-A)及其突变体，以及与PCSK9高亲和结合的能力。此外，通过反义核酸以及RNA干扰在基因水平也能明显阻断PCSK9的作用，甚至采用小分子化合物抑制PCSK9的mRNA表达，也能明显降低胆固醇的作用。显然，各种阻断PCSK9的方法均可能成为治疗性单抗之后的抗PCSK9新药。

本发明提供了一种重组可溶性EGF-A突变体融合蛋白，该融合蛋白能高亲和结合PCSK9，并能有效抑制PCSK9生物活性，最终发挥降低胆固醇的作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种融合蛋白，该融合蛋白针对LDLR中EGF(A)区的氨基酸替换/突变与人IgG FC融合蛋白(用3mEGF-FC表示)，增强EGF-FC与PCSK9的结合作用，有效抑制PCSK9活性。

本发明提供的融合蛋白由DNA重组技术或基因工程手段实现，并由以下通式表示：

X-连接肽-Y-连接肽-Z-连接肽-IgG Fc片段；其中，X、Y、Z为人LDLR(低密度脂蛋白受体)中EGF(A)多肽突变体；连接肽为(GGGGS)n。

本发明提供的融合蛋白，由人LDLR中EGF(A)区多肽突变体与人免疫球蛋白Fc片段连接形成融合蛋白，其具体序列如下：

EGF(A)多肽突变体的氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：1、3、5所述；

IgG1 Fc的氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：15所述；

IgG2 Fc的氨基酸如序列表中的SEQ ID NO：17所述；