[发明专利]完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法

权利要求书

1.一种完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)使用0～4℃的含翻译延伸抑制剂和镁离子的等渗盐溶液清洗新鲜的组织；翻译延伸抑制剂和镁离子的浓度以能有效抑制组织内细胞翻译延伸为基准；

(2)将清洗干净的组织中的多余液体去除，然后用液氮进行快速冷冻处理，冷冻至组织的温度稳定；

(3)将快速冷冻处理好的组织置于不高于-80℃的环境下保存，在该条件下，能进行储存和运输；

(4)对步骤(3)保存的组织提取RNC，得到组织内核糖体新生肽链复合物。

2.根据权利要求1所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤(1)为：将新鲜组织置于0～4℃的含翻译延伸抑制剂和镁离子的等渗盐溶液中剪碎；然后用0～4℃的含翻译延伸抑制剂和镁离子的等渗盐溶液清洗；翻译延伸抑制剂和镁离子的浓度以能有效抑制组织内细胞翻译延伸为基准。

3.根据权利要求1或2所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的翻译延伸抑制剂为放线菌酮。

4.根据权利要求3所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：所述的放线菌酮在所述的等渗盐溶液中的终浓度为0.3mg/ml或超过0.3mg/ml。

5.根据权利要求1或2所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的镁离子在所述的等渗盐溶液中的终浓度为50mM或超过50mM。

6.根据权利要求1或2所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的等渗盐溶液为DPBS溶液、PBS溶液或D-Hank’s溶液。

7.根据权利要求或21所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的新鲜组织通过如下步骤得到：从生物体上提取组织，保证在30min以内完成，而且在提取过程中避免其他组织和杂质混入，尽量保证组织的单一性；

步骤(2)中所述的将清洗干净的组织中的多余液体去除为通过使用洁净的滤纸实现。

8.根据权利要求1或2所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的不高于-80℃的环境为-196℃～-80℃的环境。

9.根据权利要求1或2所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的对步骤(3)保存的组织提取RNC包含如下具体步骤：将组织置于液氮环境中，将其进行磨碎；研磨完毕后保持在液氮环境中加入预冷至0～4℃的细胞裂解液，继续研磨混匀；然后置于冰上等待完全融化，进行裂解反应；将裂解好的组织样品于2～6℃离心，取上清；使用蔗糖密度梯度离心法获取组织样品的RNC复合体；

所述的细胞裂解液为组成如下细胞裂解液的：20mM、pH7.4的HEPES-KOH溶液，15mM MgCl₂，200mM KCl，100μg/ml放线菌酮，2mM二硫苏糖醇，体积百分比1％的Triton X-100，pH＝7.4；

所述的细胞裂解液配制时使用无菌无RNase的水和无菌器具，配制完毕后溶液需过滤除菌。

10.根据权利要求1或2所述完整获取组织内核糖体新生肽链复合物的方法，其特征在于：所述的离心的条件为4℃、16200×g离心20min。