[发明专利]改进的测序文库及其制备和应用

说明书

本发明提供一种测序文库，所述测序文库中的插入片段是待测序列与标签序列同向交替串联体，所述待测序列与标签序列同向交替串联体的制备包括将所述待测序列连接所述标签序列，单链环化和滚环复制的步骤，所述滚环复制在被油滴包裹的反应液内完成。本发明还提供该测序文库的制备方法及一种测序方法。本发明提供的测序文库及测序方法，在任何测序深度下，都能有效去除DNA扩增错误和测序错误，从而超精确检测DNA分子上存在的突变。本发明提供的测序文库，适用于微量DNA短片段甚至单链DNA测序文库的构建。

技术领域

本发明涉及一种测序文库及其制备和应用。

背景技术

第二代测序技术的发展，推动了生物学以及生物医学研究的革命性发展。但是由于高通量测序本身的特点，在测得的序列中存在约1％的碱基错误。虽然在一些应用中1％的错误率是可以忍受的，但是在很多情况下，这1％的错误却掩盖了很多真实的信息，而成为很多研究的障碍。构建一种能够快速、有效、准确地构建DNA测序文库的方法是十分必要的。

发明人在先发明的一种测序文库，如201310651462.5号专利申请文件所示，解决了现有技术存在的上述问题，但是，由于滚环扩增具有极大的序列偏好性，以至于个别环状DNA扩增倍数极大，而绝大多数环扩增的倍数很低，在后续的测序过程中，很难实现对整个基因组的全面的有效的检测。如何有效的均衡的扩增环状DNA分子，就成为一个非常关键的，亟待解决的问题。

发明内容

为了解决现有技术中环化后的DNA分子不能有效均衡扩增的问题，本发明实施例提供一种改进的测序文库及其制备和应用。

本发明的一个方面，涉及一种核酸序列滚环复制油包水反应体系，所述反应体系中，扩增反应液包裹在油滴内，所述油滴体积小于1000pL。

本发明另一方面，涉及一种测序文库，所述测序文库中的插入片段是待测序列与标签序列同向交替串联体，所述待测序列与标签序列同向交替串联体的制备包括将所述待测序列连接所述标签序列，单链环化和滚环复制的步骤，所述滚环 复制在被油滴包裹的反应液内完成。

本发明的第三方面，涉及一种核酸序列滚环复制方法，所述方法包括将反应液包裹到油滴内的步骤，所述油滴体积小于1000pL。

本发明的第四方面，涉及一种制备测序文库的方法，所述方法包括制备在待测序列与标签序列同向交替串联体的两端连接测序接头的核酸序列，所述待测序列与标签序列同向交替串联体的制备包括将所述待测序列连接标签序列，单链环化和滚环复制的步骤，所述滚环复制包括将反应液包裹到油滴内进行滚环复制的步骤。

本发明的第五方面，涉及上述测序文库在目标片段捕获测序、单链DNA片段测序、化石DNA测序或外周血游离DNA测序中的应用。

本发明的第六方面，涉及一种测序方法，该方法所用测序文库的插入片段是待测序列与标签序列同向交替串联体，所述待测序列与标签序列同向交替串联体的制备包括将所述待测序列连接所述标签序列，单链环化和滚环复制的步骤,所述滚环复制在油滴包裹的反应液中进行。

本发明提供的测序文库及其应用，至少实现了如下有益效果：

1、在任何测序深度下，都能有效去除DNA扩增错误和测序错误，从而超精确检测DNA分子上存在的突变。