[发明专利]一种检测表皮生长因子的电化学免疫传感器及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测表皮生长因子的电化学免疫传感器及其制备方法。

背景技术

表皮生长因子(EGF)是由Cohen(1962)首次在小鼠的颌下腺中发现的一种多肽，由53个氨基酸残基组成，分子量为6201Da[吕文成，郭洪波等.中华器官移植杂志，1998.19(1)：7-8]。EGF能刺激外胚层和内胚层起源的各种细胞如角膜、上皮、乳腺、肝和肾上腺髓质细胞等，使其增殖。其在创面愈合，创伤性骨折，肝损伤的修复和再生，神经干细胞增殖，皮肤细胞更新等方面均有作用。因此，需要建立一种灵敏度高，快速有效的检测表皮生长因子的方法。

目前存在EGF的临床检测方法，有ESLIA检测法[吴学诗，夏勇等.国外医学临床生物化学与检验学分册，2005.26(12)：869-871]、放射免疫分析法[陆明，王玉玘.放射免疫学杂志，2011.24(6)：628-629]、比色法等。但这些方法均存在不足。ESLIA检测法虽具有灵敏度高、特异性强等特点，但该方法抗干扰性差、市场出售的ESLIA试剂盒质量参差不齐；放射免疫测定法虽具有操作简便、成本低等优点，但该法不能检测低含量物质，放射性污染严重，被测物和标准物均不能全部参与反应，因此应用范围不广；比色法虽具有灵敏度高、经济等优点，但该法操作步骤冗长，且实验中所用的有机溶剂对人体有害。

发明内容

本发明的目的是提供一种电化学免疫传感器及其制备方法。

本发明提供的电化学免疫传感器，由下至上依次由电极、修饰层a、修饰层b和修饰层c组成；

其中，所述电极为玻碳电极；

所述修饰层a为由式Ia或式Ib所示聚多巴胺构成的膜：

式Ia

式Ib

所述式Ia和式Ib中，n均为1000-15000；

所述修饰层b由表皮生长因子(EGF)和谷胱甘肽(GSH)构成，且所述表皮生长因子(EGF)和谷胱甘肽(GSH)均粘附于所述修饰层a上；

所述修饰层c由表皮生长因子抗体修饰的纳米银溶胶制得；

所述参比电极为银/氯化银电极；

所述对电极为铂丝电极。

上述传感器中，所述表皮生长因子抗体修饰的纳米银溶胶中，纳米银颗粒的粒径为50-100nm。

所述表皮生长因子抗体修饰的纳米银溶胶为按照包括如下步骤的方法制备而得：

1)将巯基乙酸和纳米银溶胶于pH值为中性的条件下反应10-30min，得到巯基乙酸修饰的纳米银溶胶；

2)于pH值为5-6的条件下，将步骤1)所得巯基乙酸修饰的纳米银溶胶、EDC的水溶液和NHS的水溶液混合搅拌10-30min，得到活化的纳米银溶胶；

3)将步骤2)所得活化的纳米银溶胶与表皮生长因子抗体于摇床中振荡1-4h，调节体系的pH值至中性，得到所述表皮生长因子抗体修饰的纳米银溶胶。

该方法步骤1)中，所述纳米银溶胶中，纳米银颗粒的粒径为20-50nm；

所述反应步骤中，时间具体为15min；

所述纳米银溶胶为按照包括如下步骤的方法制备而得：将NaBH₄的水溶液与AgNO₃的水溶液于冰水浴中进行反应5-20min，反应完毕而得；所述反应步骤中，时间具体为10min；所述NaBH₄的水溶液的浓度为1×10^-3mol/L-5×10^-3mol/L，具体为2×10^-3mol/L；

所述AgNO₃的水溶液的浓度为0.5×10^-3mol/L-3×10^-3mol/L，具体为1×10^-3mol/L；

所述NaBH₄的水溶液与AgNO₃的水溶液的体积比具体为4：1；

所述步骤2)中，EDC的水溶液和NHS的水溶液的浓度均为1×10^-3mol/L-5×10^-3mol/L，具体为2×10^-3mol/L；EDC的水溶液和NHS的水溶液的体积比为1：1；所述纳米银溶胶中的纳米银颗粒、EDC和NHS的摩尔比为0.5mmol：0.5mmol。

本发明提供的制备所述电化学传感器的方法，包括如下步骤：