[发明专利]一种用于痕量汞离子检测的酶基电化学生物传感方法

权利要求书

1.一种用于痕量汞离子检测的酶基电化学生物传感方法，其特征在于，步骤如下：

(1)将10-20μL的含有1μM的探针DNA的孵化缓冲液滴加到清洁后的金电极表面，在4℃下孵化24小时，即得到pDNA修饰后的金电极；其中，pDNA的孵化缓冲液的成分为：0.1M NaCl、10μM三(2-羧乙基)膦和pH＝7.4的10mM三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液；

(2)将步骤(1)得到的pDNA/Au浸入到6-巯基己-1-醇缓冲溶液中，保持1-2小时，即得到处理后的pDNA/Au；其中，MCH缓冲溶液的成分为1-5mM MCH和pH＝7.4的10mM Tris-HCl；

(3)将经过步骤(2)处理后的pDNA/Au用pH＝7.4的Tris-HCl淋洗，再浸入含有浓度不大于10μM汞离子的核苷酸外切酶Ⅲ消化缓冲液中，在37-40℃恒温水浴中反应10-30分钟，即得到消化后的pDNA/Au电极；其中，Exo Ⅲ消化缓冲液的成分为pH＝8的50mM Tris-HCl、5mM MgCl₂、1mM二硫苏糖醇、0.1-1μM tDNA、1.8units/μL Exo III和0.2-0.6M NaCl；

(4)将步骤(3)得到的消化后的pDNA/Au电极浸入含有pH＝7.0的10mM Tris-HCl和50μM氯化六氨合钌的电解质溶液中，利用方波伏安进行测试并分析结果；测试参数为：初始电压-0.6V，终止电压0V，频率25Hz。

2.根据权利要求1所述的酶基电化学生物传感方法，其特征在于，探针DNA为5’端巯基修饰的单链核苷酸。

3.根据权利要求1或2所述的酶基电化学生物传感方法，其特征在于，与pDNA杂交的互补链tDNA是具有4个胸腺嘧啶失配的单链核苷酸，其碱基数比pDNA的碱基数至少多5个。

4.根据权利要求1或2所述的酶基电化学生物传感方法，其特征在于，步骤(1)中金电极在使用前需要清洁，具体方法如下：

将金电极分别在1μm、0.3μm和0.05μm粒径的氧化铝抛光粉的悬浮液中依次研磨5-10分钟，每次研磨后分别用乙醇和高纯水超声清洗5分钟，待电极干燥后，浸入体积比为3:1的浓硫酸和双氧水的混合溶液中保持30分钟，然后用高纯水清洗，作为工作电极浸入0.5M的H₂SO₄溶液中，进行循环伏安扫描，直到扫描曲线稳定，最后用高纯水清洗并用N₂吹干。

5.根据权利要求3所述的酶基电化学生物传感方法，其特征在于，步骤(1)中金电极在使用前需要清洁，具体方法如下：

将金电极分别在1μm、0.3μm和0.05μm粒径的氧化铝抛光粉的悬浮液中依次研磨5-10分钟，每次研磨后分别用乙醇和高纯水超声清洗5分钟，待电极干燥后，浸入体积比为3:1的浓硫酸和双氧水的混合溶液中保持30分钟，然后用高纯水清洗，作为工作电极浸入0.5M的H₂SO₄溶液中，进行循环伏安扫描，直到扫描曲线稳定，最后用高纯水清洗并用N₂吹干。