[发明专利]一种滑桃树新的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，涉及一种滑桃树新的分离纯化方法。

背景技术

滑桃树新（Trewiasine），分子式为C₃₇H₅₂ClN₃O₁₁，分子量为750.29，mp.173-175℃，是从大戟科(Euphorbiaceae) Isothecium subdiversoforme 滑桃树 Trewia nudiflora L.种子中分离得到的一种生物碱类活性物质。实验研究表明，滑桃树新具有广泛的生理活性，2.5μg/kg时，对小鼠艾氏癌的延命率为183%，2.5～10μg/kg时，对P388白血病小鼠的治愈率为56%-75%。对多种实验动物肿瘤如：腹水型S180、肝癌、U14及Lewis肺癌等均有明显疗效。对4种人体肿瘤细胞有明显细胞毒活性，尤以U937最为敏感，1μg/mL时，抑制率>90%。

目前尚未见滑桃树新的提取纯化方法方面的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种滑桃树新的分离纯化方法，该方法能够提取分离得到高含量的滑桃树新晶体，方法简单可行、晶型好。

本发明的分离纯化技术方案如下：

一种滑桃树新的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）提取：将原料药材粉碎，加入饱和石灰水浸泡4-8小时，然后用乙醇溶液回流提取，减压回收乙醇，得到提取浓缩液；

（2）大孔树脂柱层析：将提取浓缩液加水分散，再通过大孔吸附树脂吸附柱中，柱径高比为1:8-1:20，室温下以30-95%乙醇梯度洗脱，收集滑桃树新洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，得乙醇洗脱液；

（3）氧化铝柱层析：将乙醇洗脱液加入氧化铝柱顶端，以乙酸乙酯-乙醇混合溶液梯度洗脱，收集滑桃树新流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀；

（4）重结晶：将步骤（3）所得沉淀物用无水乙醇回流溶解，过滤，结晶，二氯甲烷-丙酮重结晶得滑桃树新。

所述步骤（2）中30-95%乙醇梯度洗脱，先用30-55%乙醇洗脱，再用80-95%乙醇洗脱，收集80-95%乙醇洗脱液，洗脱流速为1-2.5BV/h，洗脱用量为3-6BV。

所述步骤（3）中氧化铝柱为中压柱，氧化铝为100-300目的中性氧化铝。

所述步骤（3）中乙酸乙酯-乙醇溶液梯度洗脱按乙酸乙酯-乙醇体积比1:0、1:1、1:3、1:5依次洗脱。

所述步骤（4）中二氯甲烷-丙酮体积比为5:1。

本发明的有益效果是：本发明采用大孔树脂和中压氧化铝柱层析结合，分离效果好，上样量大，生产周期短；通过无水乙醇结晶，二氯甲烷-丙酮重结晶，所得产品晶型好；所用试剂毒性较低，是一种高效、低污染、低耗能的分离纯化滑桃树新的方法。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

将滑桃树种子干燥、粉碎，取5kg投入提取罐中，加入5倍量饱和石灰水室温浸泡5h，然后加入4倍量75%乙醇加热回流提取2次，每次2h，合并提取液，提取液减压回收乙醇，得到提取浓缩液，加水分散，通过大孔吸附树脂柱（柱径高比为1:10），室温条件下先用40%乙醇洗脱，再用85%乙醇洗脱，收集85%乙醇洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，取200-300目的中性氧化铝装柱，将乙醇洗脱浓缩液从顶端注入，加压条件下将乙酸乙酯-乙醇混合溶液按体积比1:0、1:1、1:3、1:5依次注入柱中，收集滑桃树新流分，减压回收试剂至有沉淀析出，放置沉淀，滤出沉淀，用无水乙醇回流溶解，结晶，再以二氯甲烷-丙酮（5:1）重结晶，干燥得滑桃树新576mg，含量95.7%。

实施例2：