[发明专利]半乳凝素-3免疫测定法

说明书

本申请是申请日为2009年10月29日、发明名称为“半乳凝素-3免疫测定法”的中国发明专利申请No.200980150730.7的分案申请。

参考相关申请

本申请要求2008年10月29日提交的美国临时专利申请No.61/109,366的利益和其优先权，将该专利申请的完整公开内容通过参考引入本文。

发明背景

心力衰竭(HF)是美国的主要公共健康问题。约500万人患有该疾病并且患者的数量正在稳步增加。HF是常见的但很严重且复杂的临床综合征，特别是在老年人之中。HF是指其中心脏不能泵动足够的血液满足身体需要的状况。不足的泵动导致血液和其他流体在肝、腹部、下肢和肺中拥塞(congestion)。因此，HF也被称为充血性心力衰竭(CHF)，虽然术语HF是首选的，因为未非所有患者都展示流体拥塞。HF引起患者的逐步恶化，通常导致心血管死亡。因此，大量患者在诊断后1至5年内死亡。然而，其他人可长期保持稳定。HF是与由心肌梗塞或再灌注损伤引起的心脏缺血极其不同的疾病。

HF的症状包括疲劳、虚弱、心跳加快或心律不齐、呼吸短促、持续咳嗽或喘鸣(wheezing)、下肢或腹部肿胀、因液体潴留导致的突然体重增长、缺乏食欲或恶心以及胸痛。目前，HF的重要诊断测试是综合2维超声心动图(comprehensive 2-dimensional echocardiogram)与多普勒血流研究，一起确定是否存在结构异常。该测试可测定泵出心室的血液分数(射血分数，EF)，其是心脏功能的重要量度。正常心脏的射血分数是约60％。还可使用一个或多个下列测试：放射性核素心室显像术、磁共振成像(MRI)、完全血细胞计数、尿分析、血清电解质、糖血红蛋白和血脂、肾功能和肝功能的测试、甲状腺功能的测试、胸片和12导联心电图(12-lead electrocardiogram)。此外，可进行生物标记物例如B-型利钠肽(BNP)的血液测试。BNP响应心肌细胞的拉伸而被上调。因此，高水平BNP标示着心脏处于应激下，并且是心力衰竭的良好指标。然而，在心力衰竭中起作用的其他机制例如炎症可能不反映在BNP的增加上。

处于发生HF风险中的患者的早期鉴定可防止快速进展。因此，优选能够在心力衰竭实际发生之前鉴定其中可能会发生心力衰竭的那些患者。此外，优选能够鉴定患有心力衰竭的那些患者，所述患者处于发生严重并发症或早产儿死亡的风险中。

目前的方法可以可靠地排除HF，但不能可靠地证明HF的存在，它们也不能预测已确定的HF的后果。因此存在对用于预测HF症状发作的可能性和评估疾病的严重度、分期和/或预测已确定的心力衰竭的后果的简单可靠方法的需要。

为了发现反映在心力衰竭中起作用的其他机制的另外的生物化学标志物，进行微阵列研究以确定与保持代偿的高血压大鼠相比较在发展至心力衰竭的高血压大鼠中上调的基因(Schroen等人(2004)Circ.Res.95(5):515-22.)。在发展至心力衰竭的大鼠中最强劲上调的基因是β-半乳糖苷-结合凝集素即半乳凝素-3。该发现被Sharma等人在研究中证实，所述研究显示高水平的半乳凝素-3预示在高血压的大鼠模型中心力衰竭发展(2004Circulation 110(19):3121-8)。该研究还显示外源地应用的半乳凝素-3能够诱发心力衰竭和过量胶原沉积。最近，人血浆和血清中半乳凝素-3的浓度与HF的严重度相关联，参见国际专利公开案No.WO2005/040817和相应的美国专利申请No.10/575,745。

半乳凝素构成特征在于其半乳糖特异性结合的一个蛋白质家族。所有半乳凝素在它们的称为糖类识别结构域或CRD的结构区域中共有共同的氨基酸序列。目前，已鉴定了15种哺乳动物半乳凝素。一个亚组包括半乳凝素1、2、5、7、10、13、14和15，其各自包含单个CRD。第二亚组包含一个种类即半乳凝素-3，其包含连接至N末端结构域的单个CDR，所述N末端结构域包含重复的短氨基酸序列例如PGA。第三个半乳凝素亚组包括半乳凝素4、6、8、9和12，其各自包含通过可变长度的连接体连接的两个CRD。全部半乳凝素具有显著的氨基酸序列同源性，并且许多出现在人循环系统中。