[发明专利]一种生防木霉F18及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种生防木霉F18，其特征在于，所述生防木霉F18的生物菌种保藏编号为：CGMCC No.9486，保藏日期为：2014年8月5日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

2.制备如权利要求1所述的生防木霉F18的方法，具体步骤如下：

（1）菌丝培养：将哈茨木霉Tr1和绿色木霉LTR-2分别接种在PDA平板上，28℃培养3-5天，用无菌水制备哈茨木霉Tr1和绿色木霉LTR-2的分生孢子悬浮液，最终悬浮液浓度为1×10⁶个/mL，按照占PD液体培养基体积的1%的接种量将孢子悬浮液分别转接到PD液体培养基中，28℃摇床培养20h；

（2）原生质体的制备：

① 向哈茨木霉Tr1和绿色木霉LTR-2的菌丝体中加入酶裂解液，菌丝体与酶裂解液的重量体积比(45-55)mg:1mL；

②在30℃，50rpm的条件下进行酶解1.5-2h，吸取酶解液，置于显微镜下观察，并用血球计数板计算原生质体数；

③ 有大量原生质体形成后，利用3层无菌擦镜纸过滤酶解液中的菌丝，然后用渗透压缓冲液冲洗3次，将滤液和冲洗液混合后4℃，4000rpm离心15min，弃上清，将沉淀用STC溶液洗涤，然后用STC溶液将沉淀悬浮，调整悬浮液中原生质体的浓度，使其为1×10⁶cfu/mL；

（3）原生质体融合

分别取哈茨木霉Tr1和绿色木霉LTR-2的原生质体各500μl，混匀，4℃，4000rpm离心15min，弃上清，向原生质体中缓慢滴加2.6mL 40%的PEG8000溶液，30℃培养30min，4℃,4000rpm离心10min，弃上清，向原生质体中加入2mL STC溶液，重悬浮，将悬浮液涂布到再生培养基平板上，28℃培养至平板上长出菌落；

（4）融合子的筛选

通过抗药性筛选、多菌灵降解筛选、平板对峙培养、稳定性检测，获得可高效降解多菌灵的生防木霉F18。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中菌丝体与酶裂解液的重量体积比为50mg:1mL。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中菌丝体在30℃，50rpm的条件下进行酶解1.5h。

5.如权利要求1所述的生防木霉F18按照常规工艺制备成微生物制剂。

6.根据权利要求5所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂选自可湿性粉剂、微乳剂、悬浮剂、水剂、乳油、水悬乳剂。

7.如权利要求1所述的生防木霉F18在降解多菌灵方面的应用。

8.如权利要求1所述的生防木霉F18在防治小麦纹枯病方面的应用。

9.如权利要求5或6所述的微生物制剂在防治小麦纹枯病方面的应用。