[发明专利]一种乙型肝炎人免疫球蛋白的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种乙型肝炎人免疫球蛋白的制备工艺，属于生物制药领域。

背景技术

乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）是由乙型肝炎疫苗免疫健康献浆员采集的乙型肝炎表面抗体效价较高的血浆，经分离、提纯、病毒灭活而制备的特异性免疫球蛋白，具有特异性被动免疫作用，能够中和体内表面抗原并将病毒清除。

乙型肝炎人免疫球蛋白在临床上可从以下几方面发挥重要的功能：1、阻断乙肝母婴垂直传播。乙型肝炎病毒可经母婴垂直传播感染新生儿，大多数婴儿是在分娩过程中吸入母血、羊水或阴道分泌物受到感染。婴儿一旦感染乙肝病毒，80～90%会成为慢性携带者。因此，阻断乙肝病毒的母婴传播非常重要。产前和产后用HBIG联合阻断HBsAg、HBeAg阳性孕妇的母婴传播，其有效保护率达到94%，能明显减少宫内感染的发生，获得目前最大限度的提高对HBsAg、HBeAg阳性母亲HBV母婴传播的阻断作用。2、预防特殊情况下的乙肝病毒感染。乙肝易感者在某种场合意外地遇到乙肝病毒感染的危险时，可以单独使用乙肝免疫球蛋白。例如医生、护士和检验人员等在给乙肝表面抗原携带者做治疗、护理或取血检验过程中，不慎手指被针尖刺破，或被手术刀割伤，患者带有乙肝病毒的血液就可以通过皮肤创伤进入上述人员的体内。在这种情况下，应立即（12h之内）给受感染人员静注乙肝免疫球蛋白1支，1个月后再重复注射1次，可起到预防感染的效果。3、能够显著提高肝移植患者的存活率和存活期。肝癌早期患者在肝移植手术后，必须长期使用人乙肝免疫球蛋白。如果没有，三个月就会感染，一年就会死亡。而在术后联合使用静注人乙肝免疫球蛋白和拉米呋定，再感染率就可从30~40%降至5~10%，大幅度提高肝移植患者的存活率和存活期。另外HBIG还有预防输血后乙型肝炎病毒感染及治疗慢性乙肝病毒携带者的功效。

目前市场上主要存在两种剂型的乙型肝炎人免疫球蛋白，分别是静脉滴注HBIG及肌肉注射HBIG，但是临床使用静脉滴注HBIG产生的不良反应明显要高一些。静脉滴注HBIG有可能发生恶心、皮疹、风疹、红斑、关节病、注射部位疼痛和过敏，用抗组胺药物和普通止痛药配合使用，能有效控制以上症状。相关报道证实，肝移植术后在给予静滴HBIG的第3天，患者出现偏执、说话困难，但神经检查正常。2d后，虽然理解力正常，但说话变得缓慢并含糊不清。9d后出现双手震颤等症状。查验汞浓度，发现已高出正常水平10倍。

现有技术中如《静脉注射用乙型肝炎人免疫球蛋白的制备方法》CN200810302536.3，该方法包括融化血浆、组分分离、过滤、沉淀溶解、滤液沉淀、层析、超滤、病毒灭活、成品配制及分装等步骤。该方法制备的注射用乙型肝炎人免疫球蛋白相对而言，质量好、收率与纯度高、病毒安全性高，具有广阔的应用前景。

目前随着HBIG在临床方面的广泛应用，该制品的需求逐年增多。近几年，虽然有不少单克隆抗体、基因工程抗体，包括人源化抗体、小分子抗体的研制开发，但由于基因工程抗体是一种新开发的技术，现在仅用于临床诊断和肿瘤治疗，此种抗体的效果如何，有待实践来证实。因此，人源特异性免疫球蛋白（包括HBIG）仍然是一种简便易行且有实用价值的特异性制剂。今后相当长的时期内，临床上仍将主要使用由人源血分离的天然血液制品。同时能够大大地提高血液制品的附加值，综合利用率得到进一步的提高。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用低温乙醇法结合层析法，制备出纯度在99%以上、IgG单体及二聚体总含量在98.0%以上、效价不低于100IU/ml的特异性乙型肝炎人免疫球蛋白。

本发明的目的是这样实现的：采用乙型肝炎疫苗免疫健康献浆员后采集的乙型肝炎表面抗体效价较高的血浆，血浆通过低温乙醇法及压滤法分离得到组分Ⅱ+Ⅲ沉淀，经溶解、压滤得到精制组分Ⅱ+Ⅲ沉淀，再经溶解、调整反应参数、压滤、深层过滤、超滤、透析步骤，调整蛋白液参数至蛋白浓度为3～6%，pH为6.4～6.6，电导率为0.175～0.205s/m，使用DEAE  Sepharose Fast Flow弱阴离子交换凝胶进行上柱层析纯化，经超滤、调整pH为4.05～4.15，加入麦芽糖作为保护剂；经低pH孵放病毒灭活及DV20滤芯除病毒，二次超滤，控制麦芽糖残留量不高于2g/L，加入甘氨酸作为保护剂，调整pH为6.6～7.2、抗-HBs效价≥100IU/ml，稀配、分装、灯检、包装、入库。