[发明专利]一种长春碱的提取及纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从长春花中提取并分离纯化长春碱的方法，属于药物提取技术领域。 

背景技术

长春花是夹竹桃科长春花属一种重要的药用植物，原产南亚、非洲东部及美洲热带。长春花全草入药可止痛、消炎、安眠、通便及利尿，全株具有毒性，误食后会造成白血球减少、血小板减少、肌肉无力、四肢麻痹等症状。长春花中含有几十种吲哚类生物碱，长春碱是其中的一种，具有抗癌的作用，为临床上广泛应用的抗肿瘤药物，具有很高的药用价值，国内外对其提取分离的研究由来已久。但是由于长春花中含有几十种生物碱，长春碱含量很低，仅为万分之几，提取并初步成盐后的硫酸长春碱粗品含量仅60%左右，无法满足使用要求，需要对其进一步纯化。 

目前报道的长春碱的提取方法有溶剂提取法、超临界萃取法、超声波提取法等，分离方法有TLC法、柱色谱法、高效逆流色谱法等。这些方法各有自己的优势和缺点，如果能对这些方法进行改进和结合，提高长春碱的提取率和纯度，将会更有利于其工业化应用。 

发明内容

本发明提供了一种长春碱的提取及纯化方法，该方法对长春碱的提取和分离纯化方法都进行了改进，所得长春碱提取率高、纯度高。 

本发明具体技术方案如下： 

一种长春碱的提取及纯化方法，包括以下步骤：

（1）取长春花，用15-25wt%的氯化钠水溶液超声浸泡15min，然后取出直接放入流速为5-8m/s的-20℃的冷空气中冷冻干燥20min，冷冻干燥后将长春花粉碎。

（2）将步骤（1）的长春花加入30体积%乙醇中，用柠檬酸调节pH为1.5，回流提取，过滤取滤液，将滤液用氢氧化钠调整pH为8-9，然后以喷雾的形式从萃取罐顶部喷入，同时将萃取剂以喷雾的形式从萃取罐的底部喷入，喷入完毕萃取收集有机相；所述萃取剂为体积比为10:1-2.5的三氯乙烯和己烷的混合物； 

（3）有机相减压除去溶剂，固体用乙醇完全溶解，加浓度5wt%的硫酸的乙醇溶液调节pH为3.8，离心、干燥得硫酸长春碱粗品；

（4）将硫酸长春碱粗品用水溶解，加饱和碳酸氢钠溶液调节pH为8-9，加入二氯甲烷萃取，二氯甲烷有机相用水洗涤直至洗涤后的水相透明无色，收集水洗后的有机相，减压蒸馏除去二氯甲烷，所得剩余物上硅胶柱，用体积比为90：10～98：2的二氯甲烷与甲醇氨饱和溶液的混合物作为流动相进行洗脱，收集无色流份，将流份减压蒸馏至干，所得固体加入体积比为9：0.3-0.8：1-3的甲醇、石油醚和乙酸乙酯的混合液中，常温超声5min，然后在-10℃低温静置24h，所得晶体在-10℃低温抽滤，-10℃冻干，得长春碱纯品。

上述步骤（1）中，长春花与氯化钠水溶液的质量比为1：9-10。 

上述步骤（1）中，氯化钠溶液的浓度优选为20wt%。 

上述步骤（2）中，长春花与30体积%乙醇的质量比为1:4-6，回流提取的时间为2-3h。 

上述步骤（2）中，滤液与萃取剂的体积比为3.5:1～6:1，优选4.7:1。 

上述步骤（2）中，滤液喷入萃取罐的速度为188-240ml/s，滤液和萃取剂同一时间喷完。 

上述步骤（2）中，三氯乙烯和己烷的体积比优选为10:1.75。 

上述步骤（3）中，固体与乙醇的质量比优选为1:0.8。 

上述步骤（4）中，对二氯甲烷有机相进行水洗时，水洗用水与二氯甲烷有机相的质量比为1:1-2。 

上述步骤（4）中，所述甲醇氨饱和溶液是向甲醇中通入氨气直至有氨气溢出所形成的氨气饱和的甲醇溶液。 

上述步骤（4）中，硅胶的目数为200-300目，剩余物与硅胶的质量比为1:10-20，优选1:15，洗脱温度为16-25℃，流动相流速为3-5ml/min。 

上述步骤（4）中，流份减压蒸馏所得的固体质量与甲醇、石油醚、乙酸乙酯总体积的比值为1g：3.5-8ml，优选1g：5ml。 

上述步骤（4）中，二氯甲烷与甲醇氨饱和溶液的体积比优选为97：3。 

上述步骤（4）中，甲醇、石油醚和乙酸乙酯的体积比优选为9:0.5:1.7。