[发明专利]一种miRNA标记物、其方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于预测、诊断和/或评价食管磷状细胞癌患者对放化疗是否存在响应的标记物及其应用，尤其涉及使用两种在人血清中稳定存在且可检测的微小核糖核酸成熟体作为预测、诊断和/或评价食管磷状细胞癌患者对放化疗是否存在响应的标记物。进一步地，本发明还提供了用于检测所述标记物的探针组合、试剂盒和生物芯片以及所述标记物的应用，具体地，通过检测受试者血清中所述标记物的表达水平和变化，来判断食管磷状细胞癌患者是对放化疗是否存在响应。

背景技术

食管癌是一种具有不良预后的致命恶性肿瘤，其中食管鳞状细胞癌(ESCC)是一种具有鳞状细胞分化的恶性上皮性肿瘤，其显微镜下特点表现为角质细胞样细胞之间存在细胞间桥，或伴有角化。

食管鳞状细胞癌在发生率、死亡率和性别比率上均显示了极大的地域差异。在西方国家的大部分地区，鳞状细胞癌每年的标准年龄发病率，男性为＜5人/10亿，女性＜1人/10万。在一些高危地区，比如法国西北部的诺曼底和卡巴度思以及意大利北部，发病率高达30人/10万，女性为2人/10万。这种癌在东方国家及许多发展中国家发病率更高。目前已经确认的高发区有伊朗、中国中部、南非以及巴西南部。在中国河南省省会郑州市，男性死亡率＞100人/10万，女性＞50人/10万。无论在高危还是低危地区，这种癌极少发生在30岁以下患者，男性及女性发病的平均年龄为65岁。在中国，食管鳞状细胞癌是最常见的食管癌类型。

手术仍然是这种癌症的主要治疗手段，然而，ESCC的预后不良。根据文献记录。长期预后率较低，五年生存率约为30％。早期发现的浅表性癌可以治愈。生存率依赖于以下几个方面，包括肿瘤诊断时的分期、所接受的治疗、患者的一般身体状况、肿瘤的形态学特点以及分子学特点。过去对于预后指标的研究大部分都集中在那些接受过外科手术的患者，极少研究接受过放化疗或多方式治疗的患者。

为了改善这种癌症的治疗效果，当前已经将术前放化疗并入治疗计划。这种术前放化疗确实导致更好的结果，增加了治愈的机会。不幸的是，对于不存在响应的患者可能不得不经受长时间、不必要的和有潜在毒性的治疗，而不能获得益处。然而，对于患者是否对放化疗存在响应，当前还没有开发出可靠的预测方法。因此，迫切需要一种方法，用来区分对放化疗有响应的患者和对放化疗没有响应的患者。

微小核糖核酸(microRNA，简写作miRNA)是一类长约19至23个核苷酸的非编码单链小核糖核酸分子。它们在进化上高度保守，广泛存在于动植物细胞中。近五年来在人类、小鼠、大鼠等多种生物物种中鉴别出数百种微小核糖核酸分子。

微小核糖核酸通过识别靶mRNA的3’端非翻译序列，与之不完全互补，从而抑制靶mRNA的翻译，是mRNA强有力的调节因子，并在基因表达调控领域中起重要作用。

微小核糖核酸与动物的许多正常生理活动密切相关，与许多疾病的发生及发展存在密切联系。微小核糖核酸完全可以作为一类新的疾病标志物，相比于传统的病理切片或单一使用的生化指标等手段，能更加准确地辅助诊断疾病，判断疾病的发展阶段，预测并发症发生和恶性疾病复发的几率，以及疾病的预后，并评价药效和疗效。

微小核糖核酸在作为疾病标志物方面的优势，使其成为近年研究的热点，相关技术及产品也相继涌现。

发明内容

为了满足上述需求，本申请发明人在寻找用于预测、诊断和/或评价食管磷状细胞癌患者对放化疗是否存在响应的标记物时，将研究目光投向较易获得，甚至常规体检中就可以收集到的血液中的微小核糖核酸。由于血液会循环至全身所有组织，并向细胞输送营养并清除废物，因此血液更能够反映出整个机体的生理、病理状况。在此基础上，发明人继续研究，并对标记物的种类进行了筛选和优化，最终获得的可解决所述的技术问题的标记物的种类大大减少，相应的探针库也得到极大简化，同时还能实现高诊断准确率。

因此，本发明的目的是一种miRNA标记物，该标记物可以用于预测、诊断和/或评价食管磷状细胞癌患者对放化疗是否存在响应。

本发明的另一个目的是提供一种用于预测、诊断和/或评价食管磷状细胞癌患者对放化疗是否存在响应的探针组合。

本发明的又一个目的是提供一种检测miRNA标记物的方法。

本发明的另一个目的是提供上述标记物的用途，包括制备相应的试剂盒和生物芯片。

本发明的再一个目的是提供使用上述标记物预测、诊断和/或评价受试者对放化疗是否存在响应的方法。

本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。