[发明专利]以羊粪浸出液培养蛋白核小球藻的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种以用羊粪浸出液为主要氮源培养蛋白核小球藻的培养基，其特征在于配方如下：

羊粪浸出液85毫升，硝酸铵3毫克，磷酸二氢钠5毫克，氯化铵2毫克，海泥抽取液1毫升，土壤抽出液1毫升，碳酸氢钠50毫克，硫酸亚铁1.5毫克，f/2微量元素溶液1.2毫升，f/2维生素溶液1.2毫升，酵母膏8毫克，蛋白胨5毫克，DL苹果酸10毫克，D-异抗坏血酸钠4毫克，硅酸钾6毫克，柠檬酸钠6毫克，吲哚乙酸1毫克，α-萘乙酸0.1毫克，麦饭石粉5毫克，钛溶液1毫升，920植物生长刺激素8国际单位，山梨酸钾10毫克，海藻酸丙二醇酯10毫克，乙酸钠4毫克，谷朊粉10毫克，羟丙基甲基纤维素3毫克，硬脂酸镁2毫克，三聚甘油单硬脂酸酯4毫克，人尿1毫升，次氯酸钠消毒后的纯净海水1000毫升，其中f/2微量元素溶液配方：ZnSO₄·4H₂O 23毫克，MnCl₂·4H₂O 178毫克，CuSO₄·5H₂O 10毫克，FeC₆H₅O₇·5H₂O 3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O 7.3毫克，CoCl₂·6H₂O 12毫克，Na₂EDTA 4.35克，纯水1000毫升；f/2维生素溶液配方：维生素B₁₂0.5毫克，维生素B₁100毫克，维生素H0.5毫克，纯水1000毫升。

2.一种以羊粪浸出液为主要氮源培养蛋白核小球藻的方法，其特征在于具体步骤如下：

培养容器为容积为3立方米的卧式白色塑料贮水罐，一体式结构，坚固耐用，强度大，抗冲击，市场有售，顶部有一盖子，带旋丝，盖子打上3个孔，其中一个穿过电源导线，导线末端连着一个40瓦节能灯，还有一个孔插入充气管，另一孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米，将塑料贮水罐先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒30分钟，然后用冷开海水冲洗3遍，装入权利要求1所述的培养基1800升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的蛋白核小球藻接种，接种密度20×10⁴cell/mL，盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，90厘米，顶端露出盖子10厘米，下端通过料管与2个散气石连接，用以充气(散气石作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)，另一根较短，16厘米，两端露出盖子即可，用以排气，两根玻璃管同样粗细，用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气∶纯二氧化碳∶氨气＝92％∶7％∶1％，白天连续充气，夜间行间隔充气，即充气30分钟，停止30分钟，如此反复，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室外培养，太阳光照射，最佳温度25±2℃，最佳光照强度3000-15000Lux，夜间打开节能灯进行照明，培养的前6天，塑料贮水罐上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在3000-8000Lux，避免强烈阳光对细胞造成光伤害，第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第8天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基80升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，蛋白核小球藻密度增加至6000×10⁴cell/mL，停止培养，从底部的水龙头将藻液放出，将塑料贮水罐用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；

所述消毒液由以下重量比的物质组成：每100份85％乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料：土荆皮30～50份、杠板归15～25份、黄柏15～25份、苦参5～15份、艾叶5～15份、辅料3-5份；消毒液制作方法：将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70℃下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30～50份、杠板归15～25份、黄柏15～25份、苦参5～15份、艾叶5～15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85％乙醇，浸泡48小时，200筛绢过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2∶1∶1；将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4℃冰箱备用。