[发明专利]一种缺血修饰白蛋白的检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及临床检验领域，具体地，涉及一种改进的缺血修饰白蛋白检测试剂盒。

背景技术

缺血修饰白蛋白(Ischemia-modified albumin,IMA)是指在组织缺血和再灌注发生时，N末端氨基酸被修饰(结合位点被铜离子占据或被乙酰化或缺失)的白蛋白，其特点是与过渡金属(镍、铜、钴)的结合能力下降。

IMA在心肌缺血后5-10分钟内即迅速升高，6-12h内回到基线，是心肌缺血发生后细胞坏死前的一个早期指标。与其它反映心肌梗塞的指标如CK-MB、Myo、cTn相比较，其动力学曲线表明，其产生的时间区更加靠前，判断心肌缺血灵敏度更高。

临床上，IMA主要应用于急性心肌缺血的早期诊断，以及急性冠状动脉综合征(ACS)早期诊断和危险分层。Sinha研究表明相对心电图(ECG)和肌钙蛋白T，IMA作为心肌缺血指标灵敏度最高。与ECG或者肌钙蛋白T结合诊断ACS，可以明显提高检测灵敏度。同时也有研究表明IMA不仅是判断心肌缺血的良好指标，而且其升高的水平还与心肌缺血的严重程度相关。也有报道指出，IMA的特异性较低，急性感染、终末期肾病、前列腺疾病和肝硬化等疾病会引起IMA升高。

目前，IMA作为评价心肌缺血的指标，已经被美国FDA批准通过，同时也是唯一一项判定心肌缺血的指标。因此，该项目具有广阔的应用前景。

目前IMA的主要检测方法是白蛋白钴结合实验(albumin-cobalt binding assay，ACB)。其主要测定原理是：

第一步：

过量Co²⁺+白蛋白→Co-白蛋白+剩余Co²⁺

过量Co²⁺+IMA→不结合；

第二步：

剩余Co²⁺+显色剂→有色产物。

缺血修饰白蛋白对Co²⁺结合能力低于正常白蛋白，血清中白蛋白与过量Co²⁺结合后，剩余的游离Co²⁺与有机显色物(二硫苏糖醇及其类似物或偶氮显色剂等)反应生成有色(红色或蓝色)产物，在一定的波长下进行比色，其吸光度与Co²⁺浓度、IMA含量成正比，与标准品进行比较，即可计算出样本中IMA的浓度。

在ACB实验中，钴离子与显色剂结合后，形成的复合物水溶性很差。特别是当样本中含有的IMA浓度比较高或者检测空白样本时，反应生成的复合物浓度高，会直接在反应过程中析出而吸附在仪器的比色装置中。这对仪器造成污染，进而影响整个仪器的分析性能。

另外还有使用ELISA、HPLC/MS等测定方法，但由于操作不方便，使用很少。

发明内容

根据本发明的一些实施方式，提供了一种改善白蛋白钴结合实验中仪器污染的方法，其包括步骤：1)提供待测样本、2)使待测样本与第一试剂接触、3)之后使待测样本与第二试剂接触。应当理解，任何本领域中已知的白蛋白钴结合实验(ACB实验)均适用于本发明改善污染的方法，例如但不限于《Cardiovascular Biomarkers:Pathophysiology and Disease Management》Springer出版社2010年；《Biomarkers in Heart Disease》James de Lemos.John Wiley&Sons,2009年中所描述的那些。