[发明专利]一种细胞原位电泳的电泳缓冲液

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞原位电泳的电泳缓冲液。

背景技术

细胞电泳(cell electrophoresis)，将细胞制备成悬浮溶液，使其单个游离的细胞分散于等渗的介质中，在电场作用下，细胞在电泳室内发生运动，这种现象称为细胞电泳。细胞原位电泳是指在保持细胞应力平衡的条件下，对细胞膜和细胞核处理后，通过电泳将细胞中的物质从细胞中分离出来的一种电泳方式。电泳时保持细胞应力平衡是进行细胞原位电泳相关检测的前提条件，但是当前没有保持细胞的应力平衡电泳缓冲液。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种细胞原位电泳的电泳缓冲液。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种细胞原位电泳的电泳缓冲液，pH为8.3，溶剂是水，溶质由Tris，Glycine，Glucose组成，其中浓度Tris:25mM；Glycine:192mM；Glucose:43.2mM。

本发明所用到的磷酸缓冲液pH值为7.4。

所述缓冲液的制备方法为将相应重量的Tris，Glycine，Glucose，加水混合即可。

细胞原位电泳(cell in situ electrophoresis,CISE)，是将待检细胞制备成单细胞悬液，使其单个游离的细胞分散于等渗即应力平衡的介质中，在电场作用下，将细胞中的物质从细胞中分离出来的一种电泳方式。

本发明的有益效果：

(1)本发明的电泳缓冲液在保持细胞等渗的条件下，能够保持细胞的应力平衡。

(2)本发明的电泳缓冲液选择葡萄糖，其无极性，且分子结构不影响后续的离心，便于细胞的回收。

附图说明

图1为细胞原位电泳装置主视图，其中1.电泳缓冲液池，2.滤膜，3.侧连接通道，4.细胞电泳槽；

图2为正常人胚肺成纤维细胞的结合状态影响的检测图，其中2a、2b和2c分别为RPA32、RPA70和POT1检测结果。

具体实施方式

下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

一种细胞原位电泳的电泳缓冲液，pH为8.3，溶剂是水，溶质由Tris，Glycine，Glucose组成，其中浓度Tris:25mM；Glycine:192mM；Glucose:43.2mM。

缓冲液的应用：

所用的装置：包括细胞电泳槽4：该槽为一内径0.8cm、外径0.95cm、长度18cm的聚苯乙烯圆管。管壁中部，沿其纵轴方向开有一9×0.6cm的矩形槽口；电极缓冲液槽1：阳极、阴极各有一个；尺寸相同，10×3.5×5cm；材质：聚苯乙烯；侧连接通道3：阳极与阴极侧各有一个；尺寸相同，内径0.8cm，外径0.95cm,长10cm的硅胶管；滤膜2：阳极与阴极侧各有一个；尺寸相同，0.2μm或0.45μm亲水聚苯醚砜(Hydrophilic polyethersulfone)滤膜；电极：阳极与阴极各有一根；6cm长，直径0.5mm电泳仪用铂丝。

胰蛋白酶消化对培养的正常人胚肺成纤维细胞(HFLF)SSBs(检测3种，分别为：RPA32、RPA70和POT1)结合状态影响的检测：

(1)用0.25％的胰蛋白酶消化法获取指数生长期的细胞浓度为2×10⁷的HFLF。

(2)细胞经磷酸盐缓冲液(PBS)离心漂洗一次，将弃上清的细胞团加入200μl PBS后分成两等分，分别滴加于两个3.5cm培养皿底部，用移液器吸头分别将两个培养皿底部的细胞悬液均匀地摊布于整个培养皿底部。

(3)将培养皿置于冰上，用254nm UV灯以1.84W/cm²强度照射，总剂量165.6J/cm²。

(4)分别用20ml PBS将两个培养皿中被照射的细胞冲洗收集于一个50ml的离心管中。

(5)收集的细胞经260g离心5分钟，弃上清后，加入4％的多聚甲醛200μl预固定3秒钟，加入46ml PBS终止固定。

(6)经260g离心5分钟弃上清后，加入0.2％Triton X-100200μl进行细胞打孔，时间10分钟，之后加入46ml PBS，470g离心5分钟，弃上清。

(7)细胞团加入936μl CISE缓冲液(三羟甲基氨基甲烷Tris:25mM；甘氨酸Glycine:192mM；葡萄糖Glucose:43.2mM；pH8.3)，并通过吹吸轻柔地将细胞分散悬浮。