[发明专利]一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒

权利要求书

1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1、试剂R2以及NGAL试剂参考标准品，其中：

    试剂R1：

    Tris  10-100mM

    NaCl  50-200mM

    BSA   0.05%-1%

Tween-20 0.01%-0.1%

PEG 0.5%-3%

NaN₃ 0.1%

    试剂R2：

    Tris  10-100mM

    NaCl  50-200mM

    BSA   0.05%-1%

Tween-20 0.01%-0.1%

NaN₃ 0.1%

蔗糖 1%-10%

NGAL抗体致敏胶乳微粒 0.1%-1%

    NGAL试剂参考标准品：

    Tris  10-100mM

    NaCl  50-200mM

    BSA   0.05%-1%

Tween-20 0.01%-0.1%

EDTA  0.5-5mM

    NaN₃ 0.1%。

2.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中PEG的数均分子量为6000。

3.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1、试剂R2以及NGAL试剂参考标准品的酸碱度均为pH7-8。

4.根据权利要求1所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中NGAL抗体致敏胶乳微粒为50-150nm聚苯乙烯乳胶微粒，其中功能聚苯乙烯的功能基团为羧基功能基团。

5.根据权利要求1或4所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2中NGAL抗体致敏胶乳微粒通过如下步骤制得：

（1）用MES缓冲液将表面带有羧基功能基团、直径50-150nm的聚苯乙烯微粒稀释至终浓度为0.5-3%（wt），加入20-90mM EDAC，混合均匀，室温震荡反应20-80分钟；

（2）离心步骤（1）混合液弃上清液，用MES缓冲液清洗两次，最终胶乳微粒重悬于 MES缓冲液至终浓度为2%，超声进行分散，得微粒分散液；

（3）用MES缓冲液稀释NGAL抗体至2mg/ml，与步骤（2）中微粒分散液等体积混合，于室温反应2-4小时；

（4）将步骤（3）反应液18000rpm离心30min后，用Tris缓冲液重悬微粒，室温封闭反应1-3小时；

（5）离心步骤（4）反应液，弃上清液，用Tris缓冲液清洗胶乳3次，最后用R2试剂保存液重悬胶乳沉淀并稀释至1%，超声充分分散后即获得NGAL抗体致敏胶乳微粒。

6.根据权利要求5所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒，其特征在于：步骤（1）至步骤（3）中所述MES缓冲液为酸碱度pH6.0的50mM MES缓冲液。

7.根据权利要求5所述的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白含量检测试剂盒，其特征在于：步骤（4）以及步骤（5）中所述Tris缓冲液为pH7.4并且含0.5% BSA、0.1% Tween-20的50mM Tris缓冲液。